XAF1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞AGS生長的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文XAF1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞AGS生長的影響及其機(jī)制的初步研究姓名：徐迪暉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：王繼德;姜泊20060510中文摘要測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株X A F l 蛋白的表達(dá)。將A G S 細(xì)胞同步化到S 期后釋放生長，測(cè)同步化后0 、2 、4 、6 小時(shí)的細(xì)胞周期分布及X A F l 蛋白的表達(dá)。M T T 法檢測(cè)轉(zhuǎn)染X A F l后對(duì)細(xì)胞的增殖的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)A 6 S ／v e c

2、 t o r ，A G S ／X A F l 細(xì)胞的細(xì)胞周期。將p D s r e d 2 一N 1 一X A F l 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)有絲分裂期表達(dá)蛋白- - M P M 一2 磷酸化蛋白的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株中M P M 一2 磷蛋白的表達(dá)。用H o e c h s t 2 2 3 5 8 核染色觀察瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染X A F l 后A G 8 細(xì)胞核的形態(tài)變化，用一微管蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株內(nèi)中心小

3、體的變化。用無血清培養(yǎng)建立凋亡刺激模型，流式細(xì)胞儀檢測(cè)X A F l 對(duì)凋亡刺激的影響，H o e c h s t2 2 3 5 8 核染色觀察凋亡，W e s t e r n b l o t 檢測(cè)活性c a s p a s e 一3 表達(dá)變化。結(jié)果1 ) 建立了穩(wěn)定表達(dá)X A F l 的A G S ／X A F l 細(xì)胞克?。篧 e s t e r n —b l o t 檢測(cè)顯示A G s ／X A F l 細(xì)胞的X A F l 表達(dá)

4、上調(diào)，A G S ／X A F l 一A S 的X A F l 表達(dá)下調(diào)。2 ) X A F l 是G ：／M 期特異表達(dá)蛋白： A G S 細(xì)胞同步化到s 期后釋放生長，同步化后2 h 的細(xì)胞7 5 ．9 5 ％分布在G ：／M 期、4 h 的細(xì)胞7 6 ．4 5 ％分布在G 。／M 期，6 h時(shí)段的細(xì)胞只有2 1 ．5 6 ％分布在G ：／M 期；同時(shí)W e s t e r n 檢測(cè)同步化后2 、4 h 的細(xì)胞X A F l 蛋白的

5、表達(dá)顯著高于0 、6 h 時(shí)段。3 ) X A F l 抑制細(xì)胞生長：通過M T T 檢測(cè)細(xì)胞增殖，與對(duì)照組相比轉(zhuǎn)染X A F l后細(xì)胞生長被抑制，轉(zhuǎn)染反義X A F l 則相反。4 ) x A F l 過表達(dá)致G 。／M 期阻滯：流式細(xì)胞儀檢測(cè)A G s ／) 【A F l 細(xì)胞中有7 5 ％左右處于G ：／M 期，而A G S ／v e c t o r 細(xì)胞中只有3 0 ％處于G 。／M 期。A G S ／X A F l 細(xì)胞中M

6、P M 一2 表達(dá)陽性占2 7 ．3 ±1 ．3 ％，A G S ／v e c t o r 中占8 ．4 ±O ．5 ％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5 ) X A F l 過表達(dá)致有絲分裂障礙：A G S ／X A F l 細(xì)胞H o e c h s t 2 2 3 5 8 核染色后觀察，沒有發(fā)現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)特征，有4 6 ．5 ％的細(xì)胞出了多倍體核，與有絲分裂障礙的描述一致。并且約2 5 ％的A G S ／X A F