RNA結(jié)合蛋白QKI-5在乳腺癌中的初步功能研究.pdf

1、雌激素與雌激素受體結(jié)合，形成雌激素-雌激素受體復(fù)合物，啟動(dòng)含有雌激素應(yīng)答元件的基因的轉(zhuǎn)錄，在組織再生和骨代謝中具有重要的生理意義。然而雌激素信號(hào)通路的異常亦可導(dǎo)致乳腺細(xì)胞表型及生物學(xué)特性的改變，從而誘發(fā)乳腺癌的生成。ERβ是1996年kuiper等從大鼠前列腺和卵巢cDNA文庫(kù)中克隆得到的一種新的雌激素受體。隨著ERβ的發(fā)現(xiàn)，人們積極開(kāi)展了ERβ與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后以及其在指導(dǎo)乳腺癌的內(nèi)分泌治療中的價(jià)值研究，但截至目前ERβ在乳腺癌

2、中的作用尚不明確。盡管如此，大量的研究還是提示ERβ對(duì)乳腺癌來(lái)說(shuō)是一個(gè)預(yù)后良好的指標(biāo)。
　　QKI是屬于STAR（signaltransductionandactivationofRNA）家族的一種RNA結(jié)合蛋白，在進(jìn)化過(guò)程中高度保守，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中參與髓鞘發(fā)育。qki基因不同突變體小鼠可以表現(xiàn)在出生前死于心血管肌肉系統(tǒng)發(fā)育障礙，或于出生后10天表現(xiàn)為快速的震顫以及到了成年強(qiáng)直性驚厥的發(fā)作。
　　除了在神經(jīng)系統(tǒng)中對(duì)于髓

3、鞘的形成發(fā)揮重要功能以外，QKI蛋白在血管發(fā)生、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞黏附、細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)形成和器官發(fā)生等方面具有舉足輕重的功能。根據(jù)RNA結(jié)合蛋白QKI與RNA序列的結(jié)合序列的特異性，對(duì)整個(gè)RNA進(jìn)行篩選發(fā)現(xiàn)，QKI可能調(diào)控多達(dá)1430個(gè)下游靶基因，而其中有24％的基因參與細(xì)胞的增殖，轉(zhuǎn)移，高度提示QKI可能在腫瘤的增殖，轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。此外，我們對(duì)qki基因上游啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該基因具有保守的ERE的結(jié)合位點(diǎn)，提示qki也可能受到雌激

4、素的調(diào)節(jié)。本研究通過(guò)RT-PCR、WesternBlot、啟動(dòng)子熒光報(bào)告系統(tǒng)等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了雌激素對(duì)QKI的表達(dá)調(diào)控，通過(guò)分析生物信息學(xué)預(yù)測(cè)的兩個(gè)潛在的QKI靶基因cdc42和par1在乳腺腫瘤中的表達(dá)以及改變QKI表達(dá)對(duì)該基因的影響，探討QKI對(duì)該基因的表達(dá)調(diào)控及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。本研究的初步結(jié)論如下：
　　1.利用Adeasy系統(tǒng)成功構(gòu)建了可表達(dá)QKI-5的腺病毒表達(dá)載體。通過(guò)該載體可以實(shí)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞中過(guò)表達(dá)QKI

5、-5的目的。
　　2．分別觀察了幾種ER受體表達(dá)不同的乳腺癌細(xì)胞系中，QKI都有表達(dá)，表達(dá)水平高低與受體ER亞型之間無(wú)明確相關(guān)性；在腫瘤侵襲性高的、ERβ陽(yáng)性的細(xì)胞中QKI表達(dá)水平最高；
　　3.細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)酚紅和吸附炭預(yù)處理后的血清培養(yǎng)兩天后，再加入雌激素作用不同時(shí)間，通過(guò)RT-PCR，western-blot檢測(cè)，qki基因的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平呈升高的趨勢(shì)。相反在ERβ的拮抗劑tamoxifen作用之后，RT-PCR檢

6、測(cè)其qki基因的轉(zhuǎn)錄水平下降。初步證明QKI可能受ER的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。通過(guò)熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)表明qki基因啟動(dòng)子的活性在雌激素處理之后有所上調(diào)，在tamoxifen作用后下調(diào)。表達(dá)調(diào)控可能參與乳腺腫瘤中QKI的表達(dá)異常，而加劇腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　4.通過(guò)人為升高和降低QKI的表達(dá)，我們發(fā)現(xiàn)cdc42,par1與QKI的表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，腺病毒載體感染乳腺癌細(xì)胞后，觀察到乳腺癌細(xì)胞發(fā)生形態(tài)和功能的改變。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)表達(dá)QKI的細(xì)胞移