探尋RNA結合蛋白QKI在前列腺癌演變過程中的作用及其分子機制.pdf

1、前列腺癌(PCa)是在歐美國家最常見的非皮膚性癌癥,在男性癌癥死亡原因中位居第二。在中國隨著生活方式的不斷改變前列腺癌的發(fā)病率近年來也呈現(xiàn)出高增長的趨勢[1,2]。目前主要的治療方法是手術治療,同時輔助放、化療和內分泌治療,治療效果具有局限性。由于前列腺癌具有發(fā)病早期無明顯癥狀等特點,很多患者被確診時往往已經喪失了最佳的手術時機。突破傳統(tǒng)治療手段的局限性成為目前前列腺癌患者治療的新的挑戰(zhàn)。隨著分子生物學技術的不斷進步,基因治療在越來越多

2、的臨床疾病診療中得到了利用,其針對靶點治療和幾乎無創(chuàng)傷性的特點能夠顯著的改善現(xiàn)有治療手段的不足。因此探尋更多與前列腺癌相關的基因,針對這些基因開展靶向治療就成為了前列腺癌治療的一個新方向。
　　現(xiàn)今,RNA結合蛋白和miRNA已經被證實是細胞生物學一個關鍵的調節(jié)點,在轉錄后調控著RNA的穩(wěn)定性、轉錄效率、轉運和剪切。mRNA調節(jié)的缺失也被證實和許多人類疾病密切相關,其中就包括癌癥[3]。RNA結合蛋白QKI隸屬于STAR家族（ev

3、olutionarily conserved signal transduction and activation of RNA family)是一個重要的轉錄后調控因子[4]。多種癌癥相關基因都是QKI調控目標如:c-fos蛋白[6],p27[7],β-catenin[8],新近研究表明,QKI的異常表達與人類許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展相關[9,10]?？傊?所有這些都指出了QKI在多種腫瘤中的抑制作用。
　　我們的研究是首次在前列腺

4、癌中報道RNA結合蛋白QKI的表達情況,同時首次報道了QKI在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中所起到的作用。通過免疫組化、Western blot和qPCR方法在病理組織標本中篩查QKI表達水平以及表達趨勢。通過對前列腺癌細胞系的篩選,選取過表達慢病毒以及基因沉默慢病毒分別對QKI的表達水平進行調整,再與對照組進行細胞生物學功能上的比對,以此闡述QKI在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中所起到的作用及其機制。
　　具體實驗分為以下2個部分:
　　1

5、)RNA結合蛋白QKI在前列腺癌組織中的表達分析
　　實驗通過對前列腺癌組織標本進行免疫組化、qPCR和western blot以及啟動子甲基化等檢測方法,檢測結果表明在前列腺癌組織中 QKI的表達水平要低于癌旁對照組織,并且隨著分化程度的不斷減低 QKI的表達水平也呈現(xiàn)降低狀態(tài)。
　　2)探尋RNA結合蛋白QKI在前列腺癌中的作用及其機制
　　實驗選取了三株前列腺癌細胞株 PC3,DU145,LNCaP并對這三株細胞

6、進行了QKI表達水平的篩選,將選取出來QKI表達水平最低的PC3細胞用過表達慢病毒感染,將表達水平相對較高的DU145細胞用基因沉默慢病毒感染,并分別構建穩(wěn)定感染細胞系。細胞模型構建成功后我們通過MTT、平板克隆實驗對穩(wěn)轉細胞系的增殖能力進行檢測,發(fā)現(xiàn)QKI能夠明顯的抑制前列腺癌細胞增殖(P<0.05)。隨后通過流式細胞儀對細胞周期和凋亡水平進行檢測,發(fā)現(xiàn)QKI可以使前列腺癌細胞出現(xiàn)G1期阻滯,減少細胞S期的進入,同時QKI可以使癌細胞

7、出現(xiàn)早期凋亡的呈倍數(shù)增長(P<0.01)。在細胞侵襲能力檢測中通過Transwell實驗我們發(fā)現(xiàn)較對照組來言QKI可以明顯的降低細胞侵襲能力(P<0.05)。最后我們?yōu)榱蓑炞C細胞實驗中的結果又進行了動物實驗,在隨機分組的裸鼠中分別皮下注射了穩(wěn)定轉染 QKI的細胞系,通過對瘤體體積,生長曲線繪制和瘤體重量的檢測發(fā)現(xiàn) QKI能夠明顯的抑制腫瘤的生長。將荷瘤取出后對瘤體組織進行的TUNEL檢測,結果提示QKI的過表達能夠明顯增加腫瘤的凋亡(P