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文檔簡介
1、研究背景及目的:
惡性腫瘤導(dǎo)致病人死亡的主要原因是瘤細胞的播散及廣泛轉(zhuǎn)移,抑制和阻斷腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是成功治療惡性腫瘤的關(guān)鍵所在。因此對惡性腫瘤轉(zhuǎn)移機制的研究是多年來研究的熱點。MTA1(metastasis associated gene 1)是已知與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)、具有去乙?;钚缘姆肿?。有研究證明腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MTA1)在轉(zhuǎn)移性前列腺癌中選擇性高表達,但是缺乏相關(guān)分子機制的研究。本實驗通過對前列腺癌高低轉(zhuǎn)移配對細胞株
2、PC-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1的表達水平進行正反兩個方面的干預(yù),在體外細胞水平上研究MTA1對前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,探討其中可能的分子機制,為前列腺癌的基因靶向治療提供新的治療靶點。
方法:
通過RT-PCR檢測高低轉(zhuǎn)移配對細胞株P(guān)C-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1mRNA的表達情況;選擇低表達MTA1細胞株2B4進行MTA1正義轉(zhuǎn)染,經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定表達的陽性細胞克隆
3、;同時選擇高表達MTA1細胞株1E8進行siRNA反義干預(yù);利用Western blot分別驗證轉(zhuǎn)染和干預(yù)前后蛋白水平的變化;通過劃痕實驗、Transwell實驗檢測細胞侵襲運動的改變;共聚焦顯微鏡成像觀察細胞骨架的變化;黏附實驗觀察細胞黏附能力的改變。
結(jié)果:
1、MTA1在高低轉(zhuǎn)移前列腺癌細胞株P(guān)C-3M-1E8和PC-3M-2B4中表達差異明顯,在1E8中表達強度明顯高于2B4。
2、正義
4、轉(zhuǎn)染和反義干預(yù)后通過Western blot的方法驗證MTA1蛋白水平的變化,有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義,說明MTA1成功轉(zhuǎn)染至1E8細胞、siRNA反義干預(yù)2B4效率明顯。
3、劃痕實驗、Transwell說明MTA1能明顯增強細胞的侵襲轉(zhuǎn)移運動能力。
4、Confocol發(fā)現(xiàn)MTA1能使骨架極性增強和微管微絲聚集。
5、黏附實驗說明MTA1可以抑制細胞間的黏附。
結(jié)論:
5、在前列腺癌高低轉(zhuǎn)移潛能配對細胞株中,采用基因轉(zhuǎn)染和RNA干預(yù)技術(shù)相結(jié)合,通過侵襲轉(zhuǎn)移、骨架染色、黏附等實驗驗證了MTA1在侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。結(jié)果顯示,隨MTA1的表達增高,前列腺癌細胞的侵襲能力明顯增強,同時反義干預(yù)后侵襲能力可以得到逆轉(zhuǎn);并且我們發(fā)現(xiàn)MTA1與細胞的黏附能力成負相關(guān),此結(jié)論在以往有關(guān)前列腺癌的研究中未見報道。細胞黏附能力通常由多種黏附分子共同調(diào)控,MTA1與黏附分子之間的關(guān)系有待進一步的深入研究。在以往的研究中,雖已通
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