鋅指蛋白ZNF382在乳腺癌中的功能研究.pdf

1、目的：本研究檢測(cè)了鋅指蛋白ZNF382（Zinc-finger protein382）在乳腺癌細(xì)胞中，乳腺癌配對(duì)組織（癌和癌旁）及正常乳腺癌上皮組織中的的表達(dá)情況。ZNF382位于19q13.12，并已有文獻(xiàn)報(bào)道在結(jié)腸癌，鼻咽癌中它可作為抑癌基因誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖作用。ZNF382通過下調(diào)AP-1,NF-κ1信號(hào)通路發(fā)揮抑癌基因作用，它還可以通過與HP1蛋白相互作用導(dǎo)致基因由常染色質(zhì)向易染色質(zhì)轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致靶基因沉默。文獻(xiàn)顯示乳腺癌

2、組織及多株乳腺癌細(xì)胞株中均存在ZNF382表達(dá)下調(diào)。故我們提出假設(shè)：ZNF382是否作為一個(gè)關(guān)鍵性抑癌基因參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，找出乳腺癌早期篩查的生物學(xué)靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1. RT-PCR檢測(cè) ZNF382基因在人乳腺癌細(xì)胞株（BT549，MDA-MB-231，MCF-7，T47D，MDA-MB468，T47D，SK-BR-3，BT549，HBL100）中的表達(dá)情況。RT-PCR檢測(cè)人乳腺正常組織中ZNF382 mR

3、NA表達(dá)水平，通過qRT-PCR檢測(cè)乳腺癌和癌旁組織中ZNF382的表達(dá)量。
　　2.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ZNF382表達(dá)下調(diào)或缺失的乳腺癌細(xì)胞株(MB231，MCF7)，篩選并鑒定穩(wěn)定表達(dá)ZNF382的細(xì)胞株。
　　3.體外及體內(nèi)細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)：流式儀檢測(cè)細(xì)胞周期、CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)，觀察實(shí)驗(yàn)組（過表達(dá)基因ZNF382組）與對(duì)照組（空質(zhì)粒）對(duì)人乳腺癌細(xì)胞功能的影響。
　　結(jié)果：
　

4、　1.在乳腺正常組織中ZNF382呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，在多株乳腺癌細(xì)胞中有表達(dá)下調(diào)或缺失，且在ER-HER2+及三陰性乳腺癌組織中ZNF382在癌中的表達(dá)明顯低于癌旁，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)MB231和MCF7瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的周期改變，結(jié)果顯示：外源性表達(dá)ZNF382能阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，其中MB231細(xì)胞株中G1期細(xì)胞比率由41.09％增加到50.49%，MCF7中G1期細(xì)胞比率由54.56%增加到62.

5、7%（p＜0.001）；CCK8實(shí)驗(yàn)提示過表達(dá)ZNF382可明顯抑制MCF7細(xì)胞的增殖能力；在劃痕及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)中,ZNF382能明顯抑制MB231細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)論：在乳腺癌中,ZNF382的表達(dá)常常低于癌旁組織及正常乳腺組織。在ZNF382表達(dá)下調(diào)或缺失的乳腺癌株中恢復(fù)ZNF382表達(dá)能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，并能明顯抑制乳腺癌細(xì)胞MB231的遷移能力。綜上所述：ZNF382在