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文檔簡介
1、【目的】 研究EB病毒潛伏膜蛋白1(LMP1)對鼻咽癌細(xì)胞粘附分子E-cadherin和ICAM-1 表達(dá)的影響,探討LMP1在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)的機(jī)制。 【方法】 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測31例鼻咽粘膜慢性炎、32例鼻咽癌組織和24例鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中LMP1、E-cadherin和ICAM-1蛋白的表達(dá)。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和RT-PCR檢測E-cadherin和ICAM-1在體外培養(yǎng)的高分化鼻咽
2、癌細(xì)胞系CNE1、低分化鼻咽癌細(xì)胞系CNE2Z以及轉(zhuǎn)染了LMP1基因的CNE1細(xì)胞株——CNE1-GL 細(xì)胞中的表達(dá)。通過細(xì)胞平板克隆形成實驗來檢測LMP1對鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用細(xì)胞——細(xì)胞粘附實驗、細(xì)胞——基質(zhì)粘附實驗、劃痕實驗和細(xì)胞運(yùn)動實驗檢測LMP1對細(xì)胞粘附和運(yùn)動能力的影響。 【結(jié)果】 臨床病理標(biāo)本免疫組化結(jié)果顯示,鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中LMP1蛋白的陽性率分別為:22.6%、
3、62.5%和75%(P<0.01):E-cadherin蛋白的陽性率分別為:100%、46.9%和29.2%(P<0.01);ICAM-1蛋白陽性表達(dá)率分別為:25.8%、65.6%31 75%(P<0.01)。Spearman 相關(guān)分析顯示,在鼻咽癌組織和鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中,LMP1 與 E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(鼻咽癌:r=0.353,P<0.05;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶:r=-0.502,P<0.05);而在鼻咽癌組織和鼻咽
4、癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中,LMP1與ICAM-1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(鼻咽癌:r=0.378,P<0.01;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶:r=0.735,P<0.01)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示:LMP1蛋白在CNE1、CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞中的強(qiáng)陽性率分別為0、(86.27±3.45)%和(96.60±3.03)%(P<0.01);E-cadherin 蛋白的強(qiáng)陽性率分別為(37.47±1.50)%、(29.00±1.20)%和(19.53±1.92)%(
5、P<0.01):ICAM-1蛋白的強(qiáng)陽性率分別為(5.27±1.45)%、(80.80±3.70)%和(93.33±4.23)% (P<0.01)。RT-PCR結(jié)果表明,與CNE1細(xì)胞相比較,CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞中E-cadherin的mRNA 表達(dá)明顯降低(P<0.01),而ICAM-1的mRNA表達(dá)則明顯升高(P<0.01)。細(xì)胞克隆形成率結(jié)果:CNE1、CNE2Z和CNE1-GL各細(xì)胞的克隆形成率分別為(70.22±
6、3.02)%、(80.67±2.19)%和(86.22±1.50)%(P<0.05)。腫瘤細(xì)胞同質(zhì)粘附實驗顯示,CNE2Z和CNE1-GL 細(xì)胞的同質(zhì)粘附能力較CNE1細(xì)胞弱(P<0.05)。腫瘤細(xì)胞——基質(zhì)粘附實驗得出CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞的異質(zhì)粘附能力(平均光密度值分別為0.537±0.054和0.601±0.026)較CNE1細(xì)胞(平均光密度值為0.463±0.009)強(qiáng)的結(jié)果(P<0.01)。劃痕實驗結(jié)果:CNE2Z和C
7、NE1-GL細(xì)胞劃痕長滿的時間分別為21.110±0.697h和18.887±0.510h,與CNE1細(xì)胞(32.000±0.883h)相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。腫瘤細(xì)胞運(yùn)動實驗結(jié)果顯示,CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞穿過PVPF膜的細(xì)胞數(shù)平均值分別為103.333±7.095和119.333±6.028,與CNE1細(xì)胞的平均值46.333±7.024相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 【結(jié)論】 在
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