應(yīng)用RNAi和反義RNA改善β地貧小鼠的貧血癥狀.pdf

1、β地中海貧血是一組以血紅蛋白β-珠蛋白鏈合成減少(β+)或缺乏(β0)，使α珠蛋白肽鏈相對(duì)增多，導(dǎo)致α/β珠蛋白鏈不平衡，出現(xiàn)溶血性貧血。本實(shí)驗(yàn)我們采用轉(zhuǎn)錄后的基因治療策略，目的是降低β654地貧小鼠(Hbbth-4/Hbb+)體內(nèi)過(guò)多α珠蛋白表達(dá)，升高正常的β珠蛋白表達(dá)。我們應(yīng)用慢病毒作基因轉(zhuǎn)移載體，構(gòu)建了特異性針對(duì)小鼠α珠蛋白的RNA干擾載體(shRNA載體)、針對(duì)人異常剪接β654mRNA的反義RNA載體以及shRNA和反義RNA

2、共表達(dá)載體。然后，通過(guò)包裝病毒感染小鼠的受精卵，制備了三種轉(zhuǎn)基因小鼠：α-Hbbth-4/Hbb+(shRNA)、βα-Hbbth-4/Hbb+(反義RNA)和αiβα-Hbbth-4/Hbb+(shRNA+反義RNA)。各種轉(zhuǎn)基因小鼠及其后代均未見(jiàn)轉(zhuǎn)基因技術(shù)所致的異常表現(xiàn)，研究發(fā)現(xiàn)，治療載體整合的β654地貧小鼠各種血液學(xué)指標(biāo)、髓外造血現(xiàn)象明顯改善。在αiβα-Hbbth-4/Hbb+(shRNA+反義RNA)小鼠體內(nèi)，這種治療效果更

3、為明顯，可能與α/β-珠蛋白比例得到了較好改善有關(guān)。各治療β654地貧小鼠后代β654地貧小鼠的存活率明顯改善，尤其是αiβα-Hbbth-4/Hbb+(shRNA+反義RNA)小鼠，后代β654地貧小鼠存活率為97％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未治療小鼠的45.4％。當(dāng)αiβα-Hbbth-4/Hbb+小鼠與β654地貧小鼠Hbbth-4/Hbb+交配后，我們還得到了一只存活的純合子小鼠(Hbbth-4/Hbbth-4)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明改善α/β-珠蛋白