無心跳供體肺移植后結(jié)構(gòu)和功能變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討不同熱缺血時(shí)間對(duì)無心跳供體肺移植后結(jié)構(gòu)和功能的影響，及無心跳供體肺缺血再灌注損傷的機(jī)制。 方法：新西蘭大白兔30只，按隨機(jī)分配原則分為有心跳供體組(HBD)，無心跳供體熱缺血30分鐘組(NHBD-30)，無心跳供體熱缺血60分鐘組(NHBD-60)，每組5對(duì)，分別為供體和受體。供、受體兔均采用30％烏拉坦麻醉，頸部切開氣管插管接動(dòng)物呼吸機(jī)通氣，50％濃度氧氣通氣。HBD正中切口開胸，主肺動(dòng)脈注入肝素700U／Kg，灌注

2、4oc改良LPD液200ml。灌注壓50cmH20，灌注后整體切取心肺浸泡保存于4℃改良LPD液中。NHBD肝素化后阻斷主動(dòng)脈、肺動(dòng)脈，心跳停止后維持機(jī)械通氣，原位室溫放置30分鐘或60分鐘后獲取供肺，操作同HBD。受體兔頸動(dòng)脈置入18號(hào)穿刺針，間斷給藥維持麻醉。經(jīng)左側(cè)第五肋間切口進(jìn)胸，游離左上下肺靜脈、左肺動(dòng)脈、左肺支氣管，完整切除左肺。供肺右肺門絲線雙重結(jié)扎，于兩結(jié)扎線之間離斷，保持供體右肺膨脹狀態(tài)繼續(xù)冷保存10小時(shí)。修剪供體左肺，

3、行原位左肺移植，按支氣管、肺動(dòng)脈、房吻合順序吻合，吻合完成后緩慢開放肺動(dòng)脈。術(shù)后維持輔助呼吸4小時(shí)，經(jīng)右側(cè)第五肋間進(jìn)胸，阻斷右肺門，測(cè)定肺動(dòng)脈平均壓、動(dòng)脈血Pa02及PaC02、髓過氧化物酶、肺濕干重比等指標(biāo)，觀察期結(jié)束后留取標(biāo)本行病理及免疫組織化學(xué)檢查。 結(jié)果： 1．阻斷右肺門后，HBD組、NHBD-30組存活時(shí)間均超過30分鐘，NHBD-60組有2只15分鐘后心跳停止，2只20分鐘后心跳停止，僅1只存活超過30分鐘。

4、2．肺動(dòng)脈平均壓(MPAP)的變化：在阻斷右肺門后15、30分鐘，NHBD-30組和HBD組相比，MPAP有所增高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著意義。NHBD-60組與NHBD-30組和HBD組相比，阻斷前MPAP沒有明顯差別，但在阻斷右肺門后，MPAP明顯增高，差別有顯著意義(P<0．05)。 3．LPD液灌注時(shí)間：NHBD-30組和HBD組相比，LPD液灌注時(shí)間差別無顯著意義(／>0．05)：NHBD-60組與NHBD-30組和HBD

5、組相比，LPD液灌注時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差別有顯著意義(P<0．05)。 4．動(dòng)脈血Pa02及PaC02：在阻斷右肺門后15、30分鐘，NHBD-30組和HBD組相比，Pa02有所降低，但統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著意義，動(dòng)脈血PaC02差異無顯著意義(P>0．05)：NHBD-60組與NHBD-30組和HBD組相比，輔助呼吸期間Pa02、PaC02沒有明顯差別，但在阻斷右肺門后，Pa02明顯降低，PaC02明顯增高，差別有顯著意義(P<0．05

6、)。 5．肺組織濕干重比(W／D)：NHBD-30組和HBD組相比，肺濕干重比差別無顯著意義(P>0．05)；NHBD-60組與NHBD-30組和HBD組相比，肺干／濕重比明顯減小，差別有顯著意義(P<0．05)。 6．髓過氧化物酶(MPO)含量：W1T30分鐘時(shí)，肺組織MPO含量與HBD比較有輕度增高，但差別無顯著意義(P>0．05)；而當(dāng)WIT60分鐘時(shí)，肺組織MPO含量與其他兩組比明顯升高(P<0．05)。

7、 7．肺組織病理改變：光鏡下：HBD肺小葉結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁無增厚，內(nèi)皮完整：NHBD-30肺泡壁輕度增寬，血管內(nèi)皮完整；NHBD-60肺泡壁增寬，伴有散在的纖維蛋白沉積，血管內(nèi)皮完整，有大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，可見較多的肺泡吞噬細(xì)胞，ICAM．1表達(dá)呈強(qiáng)陽性部位常伴有中性粒細(xì)胞的聚集。透射電鏡下：NHBD-30灌注后I、II型肺泡上皮細(xì)胞大致正常，部分肺泡上皮細(xì)胞水腫脫落，染色質(zhì)邊集，可見到少量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；NHBD-60灌注后肺泡間隔

8、內(nèi)毛細(xì)血管淤血明顯，血管擴(kuò)張，肺泡腔內(nèi)紅細(xì)胞漏出明顯，成堆分布，伴纖維素滲出，可見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肺泡上皮水腫、脫落致肺泡壁變薄、斷裂，胞漿內(nèi)板層小體排空，有的上皮細(xì)胞自溶。 8．肺組織中ICAM．1的表達(dá)：NHBD-60組左肺移植再灌注后肺泡區(qū)、小動(dòng)脈區(qū)ICAM．1表達(dá)明顯上調(diào)，與HBD及NHBD-30比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；三組右肺冷保存10h后與對(duì)照組比較，各區(qū)無顯著差異，而與NHBD-60組左肺移植再灌注后比

9、較各區(qū)均有顯著差異，(P<0．05)。 結(jié)論：1、熱缺血30分鐘的無心跳供體肺結(jié)構(gòu)和功能未發(fā)生顯著改變，可以用于兔的肺移植；熱缺血60分鐘的無心跳供體肺結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，功能基本喪失，不適合兔的肺移植。 2、無心跳供體肺短時(shí)間的熱缺血沒有造成嚴(yán)重的肺組織損傷，尚未能觸發(fā)ICAM一1表達(dá)上調(diào)以及白細(xì)胞在肺組織內(nèi)黏附、聚集，從而尚未造成嚴(yán)重的移植肺再灌注損傷。3、ICAM-1表達(dá)上調(diào)發(fā)生在移植肺的再灌注期。 無心跳供體肺

10、移植是當(dāng)今肺移植研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。目前在無心跳供體的安全缺血時(shí)限，肺泡細(xì)胞活力及移植后肺功能的影響因素等方面已進(jìn)行了深入的研究。本文就影響無心跳供體肺泡細(xì)胞活力及肺移植術(shù)后肺功能的相關(guān)因素作一綜述。 肺移植已經(jīng)成為治療各種終末期肺病的有效方法。盡管肺移植在世界范圍內(nèi)得到了廣泛的開展，但病例數(shù)卻一直得不到顯著提高，其中一個(gè)重要原因就是滿意的供體肺嚴(yán)重短缺。人們采用多種對(duì)策解決肺移植供體短缺問題。對(duì)于小胸腔患者采用雙側(cè)肺葉移植可以同時(shí)

11、治療2名患者，但該方法在臨床實(shí)踐中存在困難?；铙w肺移植也是一種增加供體來源的方法，但是存在供者死亡風(fēng)險(xiǎn)。采用所謂的“邊緣性供體”可以增加供體數(shù)量，但是可能會(huì)導(dǎo)致術(shù)后死亡率增加。異種移植不受來源限制，但卻難以解決復(fù)雜的免疫排斥反應(yīng)問題。實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證明，在機(jī)體死亡后肺組織可以“存活”，并且在循環(huán)停止和死亡后的一段時(shí)間內(nèi)可以用于肺移植。該假設(shè)基于肺是唯一不依賴循環(huán)提供氧氣的實(shí)體器官。肺實(shí)質(zhì)細(xì)胞通過肺泡獲得供氧，肺毛細(xì)血管呈現(xiàn)“竊氧”現(xiàn)象。肺