改良HTK液灌注對(duì)無心跳供體豬心的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分、無心跳供體豬心熱缺血時(shí)限的探討
　　 目的：探討可用于移植的無預(yù)處理的無心跳供體豬心熱缺血時(shí)限。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)家豬21對(duì)(每對(duì)含供、受體各一只)，共分成四組。S0組(對(duì)照組n=6例)：供體心臟以Stanford液1000ml主動(dòng)脈根部灌注，心臟停跳后立即切取供心，置于4℃Stanford液中保存2 h；S15組(熱缺血15 min組n=6例)：心臟放血停跳，熱缺血15 min后，用4℃Stanford液10

2、00 ml灌注，切取供心，置于4℃Stanford液中保存2 h；S30組(熱缺血30 min組n=6例)：心臟放血停跳，熱缺血30 min；S45組(熱缺血45 min組n=3例)：心臟放血停跳，熱缺血45 min；S30組、S45組灌注及保存方法同S15組。各組均以雙腔心臟移植方法行原位移植，監(jiān)測(cè)供體心臟移植前后的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。測(cè)定心肌酶、肌鈣蛋白I、ATP、心肌含水量等指標(biāo)，以及電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 統(tǒng)計(jì)

3、學(xué)方法：比較兩組之間的差異采用student t檢驗(yàn)，多組間的差異比較采用方差分析。
　　 結(jié)果：心臟移植實(shí)驗(yàn)中S0、S15、S30組均成功復(fù)跳，脫離體外循環(huán)輔助，S45組均無法復(fù)跳。與S0、S15組比較，S30組復(fù)跳時(shí)間、并行循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)。S30組心輸出量、ATP含量明顯下降(P<0.05)，心肌含水量、心肌酶、肌鈣蛋白I明顯升高(P<0.05)。電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)S0、S15、S30組心肌有損傷，以S30組損傷

4、較重，但結(jié)構(gòu)尚完整。S45組電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，為不可逆改變。
　　 結(jié)論：
　　 1、常溫失血30分鐘內(nèi)無預(yù)處理的無心跳供體豬心可用于心臟移植研究；
　　 2、常溫失血45分鐘后，無預(yù)處理的無心跳供體豬心的心肌超微結(jié)構(gòu)已經(jīng)造成了不可逆轉(zhuǎn)的嚴(yán)重破壞，不可用于心臟移植。
　　 第二部分、改良HTK液灌注對(duì)無心跳供體豬心的保護(hù)作用
　　 目的：探討改良HTK液灌注在熱缺血30分鐘無心跳供體豬心移

5、植中的保護(hù)作用。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)家豬24對(duì)(每對(duì)含供、受體各一只)，共分成四組。S0組(對(duì)照組n=6例)：心臟以Stanford液1000ml主動(dòng)脈根部灌注，心臟停跳后立即切取供心，置于4℃Stanford液中保存2 h；S30(常規(guī)灌注組n=6例)：心臟放血停跳熱缺血30 min后，用4℃ Stanford液1000 ml灌注，切取供心置于4℃Stanford液中保存2 h；SH30(HTK灌注組n=6例)：心臟放血停跳熱缺

6、血30 min后，灌注HTK液1000ml，切取供心.置于4℃HTK液中保存2 h，心臟復(fù)跳前灌注500ml去白細(xì)胞血；SHO30(改良HTK灌注組n=6例)：心臟放血停跳后熱缺血30 min，灌注改良HTK液1000ml(含血栓素酶抑制劑10mg肝素5mg)，切取供心，置于4℃改良HTK液中保存2 h，心臟復(fù)跳前灌注500ml去白細(xì)胞血(含血栓素合成酶抑制劑5mg+肝素3mg)。各組均以雙腔靜脈原位心臟移植方法行原位移植，監(jiān)測(cè)供體心臟

7、移植前后的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，測(cè)定心肌酶、肌鈣蛋白I、ATP、TXB2、SOD、MDA、心肌細(xì)胞凋亡、Bcl-2，Bax，Caspase-3基因蛋白水平的表達(dá)情況等指標(biāo)，電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：比較兩組之間的差異采用student t檢驗(yàn)，多組間的差異比較采用方差分析。
　　 結(jié)果：SH30、SHO30組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均優(yōu)于S30組(P<0.05)。SH30、SHO30組間血流動(dòng)力學(xué)與S0組無差別(P

8、>0.05)，但其余生化指標(biāo)較S0組差(P<0.05)。SH30、SHO30組間血流動(dòng)力學(xué)無明顯差異(P>0.05)，SHO30在心肌酶學(xué)、cTn I、TXB2、ATP、SOD、MDA指標(biāo)優(yōu)于SH30組(P<0.05)，而心肌細(xì)胞凋亡、Bax、Caspase-3基因蛋白水平的表達(dá)高于SH30組，Bcl-2基因蛋白的表達(dá)低于SH30組。心肌超微機(jī)構(gòu)提示S0、SHO30組未發(fā)現(xiàn)血栓，而在S30組有大量血栓，SH30組也在冷保存后發(fā)現(xiàn)微循環(huán)血

9、栓。從心肌結(jié)構(gòu)、線粒體及微血管內(nèi)皮細(xì)胞變化來看，S0組最完整，SHO30次之，S30組最差。
　　 結(jié)論：
　　 1、改良HTK液灌注可以減輕熱缺血30分鐘豬NHBD心臟缺血再灌注損傷。
　　 2、血栓素合成酶抑制劑與肝素聯(lián)合應(yīng)用可以改善熱缺血30分鐘豬NHBD供心心肌微循環(huán)，增強(qiáng)對(duì)豬NHBD供心的保護(hù)作用。
　　 3、血栓素合成酶抑制劑可以減輕心肌缺血再灌注損傷過程中細(xì)胞凋亡。