蘋果多酚抑制ACC-M細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、蘋果多酚(Apple polyphenols，AP)由于具有抗氧化、抗衰老、抗過(guò)敏和抗癌等多種藥理作用，在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。據(jù)報(bào)道蘋果多酚對(duì)結(jié)腸癌、乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌等人體多種腫瘤有顯著抗癌作用，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒副作用，是一類極具開發(fā)前景的天然抗癌物質(zhì)。鑒于腺樣囊性癌(Adenoid cystic carcinoma，ACC)目前的治療方法以擴(kuò)大切除手術(shù)為主，但術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移仍難以控制，因此人們?cè)絹?lái)越重視術(shù)后輔助治療。

2、目前常用的化療藥物毒性強(qiáng)，不良反應(yīng)大，殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，還會(huì)殺傷一定數(shù)量的正常增殖細(xì)胞。本研究采用蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，觀察蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞的體外增殖及對(duì)VEGFR2、Caspase—3基因表達(dá)的影響，以闡明蘋果多酚的作用機(jī)制，為臨床治療腺樣囊性癌提供一種新思路。 第一部分蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞增殖的影響 目的：探討蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞體外增殖的影響。 方法：建立ACC—M細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

3、，臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)檢測(cè)其活力；MTT法檢測(cè)蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞毒作用和最佳作用濃度范圍；倒置顯微鏡觀察蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變；流式細(xì)胞術(shù)研究蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞周期和凋亡的影響。 結(jié)果：當(dāng)ACC—M細(xì)胞傳代培養(yǎng)到第3、4天，達(dá)80％融合度時(shí)，細(xì)胞活力最強(qiáng)，活細(xì)胞率>98％，此時(shí)細(xì)胞適合消化傳代或研究；蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)隨著時(shí)間和濃度的增加而增強(qiáng)，具有時(shí)間，濃度依賴效應(yīng)；在100～250μg

4、/ml濃度下作用48h，對(duì)ACC—M細(xì)胞有顯著的抑制作用，而對(duì)NIH3T3細(xì)胞幾乎無(wú)毒性作用，是研究蘋果多酚抑制ACC—M細(xì)胞增殖的最佳濃度；蘋果多酚作用下，ACC—M細(xì)胞開始變得細(xì)長(zhǎng)，核漿比例變小，接著細(xì)胞皺縮，變圓，可見分裂相減少，然后核固縮碎裂，出現(xiàn)凋亡小體，細(xì)胞漂浮，并且細(xì)胞形態(tài)改變程度隨著蘋果多酚濃度增加而增強(qiáng)；流式細(xì)胞術(shù)PI染色法顯示：實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞構(gòu)成比高于對(duì)照組，S期和G2/M期細(xì)胞構(gòu)成比及細(xì)胞增殖指數(shù)均低于對(duì)照

5、組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；FITC—annexin V/PI染色法顯示：對(duì)照組細(xì)胞活力良好，實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)有凋亡和死亡細(xì)胞，隨著濃度的增高凋亡和死亡細(xì)胞數(shù)量增多，但不同濃度的實(shí)驗(yàn)組均為凋亡細(xì)胞多于死亡細(xì)胞。 結(jié)論：蘋果多酚可在體外抑制ACC—M細(xì)胞增殖，同時(shí)誘導(dǎo)ACC—M細(xì)胞凋亡，可能對(duì)腺樣囊性癌具有抗癌作用。 第二部分蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞VEGFR2、caspase—3表達(dá)的影響 目的：通過(guò)檢測(cè)蘋

6、果多酚作用下ACC—M細(xì)胞VEGFR2、Caspase—3基因表達(dá)的變化，探討蘋果多酚抑制ACC—M細(xì)胞增殖機(jī)制。 方法：分別用0、150、250μg/ml蘋果多酚與ACC—M細(xì)胞共培養(yǎng)48h后，RT—PCR和Western—blot檢測(cè)蘋果多酚對(duì)ACC—M細(xì)胞VEGFR2、Caspase—3mRNA和蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：隨著蘋果多酚濃度的增加，ACC—M細(xì)胞VEGFR2 mRNA表達(dá)減弱，而ACC—M細(xì)胞Caspa