紅豆越橘多酚對氧化誘導(dǎo)損傷及癌細(xì)胞增殖抑制作用研究.pdf

1、自由基醫(yī)學(xué)研究表明自由基引發(fā)的氧化損傷與人類近百余種疾病密切相關(guān),因此評價(jià)和篩選具有強(qiáng)抗氧化活性的天然產(chǎn)物成分已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢。本論文選取紅豆越橘為研究對象,采用活性跟蹤的方法,獲得了活性最強(qiáng)的紅豆越橘多酚(LBP),并對其主要成分進(jìn)行分析鑒定。系統(tǒng)的分析了LBP的體外抗氧化活性,對輻射誘導(dǎo)機(jī)體損傷的防護(hù)作用及對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制活性,并對抗氧化活性和抗癌細(xì)胞增殖活性進(jìn)行了相關(guān)性分析。結(jié)果顯示,LBP具有較強(qiáng)的抗

2、氧化和抗癌細(xì)胞增殖活性且具有良好的相關(guān)性,說明漿果中天然存在的植物化合物的聯(lián)合作用在抗氧化以及腫瘤預(yù)防方面至關(guān)重要。
　　采用活性跟蹤的方法分離純化野生紅豆越橘,首先用80％丙酮冷凍提取游離型酚類和類黃酮,濃縮后用大孔吸附樹脂X-5富集分離紅豆越橘多酚,多酚含量和ABTS抗氧化做指標(biāo)確定乙醇梯度洗脫有效組分,并命名為LB-1,LB-2,LB-3,LB-4,其總洗脫物命名為LB-MIX(LBP)。用MTS法檢測以上5個(gè)組分抗結(jié)腸癌H

3、T29、卵巢癌Hela、肺癌A549和肝癌HepG-2細(xì)胞增殖活性,結(jié)果顯示,LBP具有較好的抑制幾株癌細(xì)胞的增殖活性。選取抗癌活性較強(qiáng)的順鉑為陽性對照。為了鑒定此純化物的化學(xué)組成,本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-ESI-MS聯(lián)用的方法定性分析紅豆越橘多酚的組成成分。結(jié)果顯示,其主要成分有9種花色苷,4種原花青素和5種酚酸。
　　系統(tǒng)的研究了LBP的體外抗氧化活性作用。如清除生理自由基、非生理自由基、還原能力、螯合能力、抗脂質(zhì)過氧化能力和輻射

4、誘導(dǎo)氧化損傷的防護(hù)能力等,結(jié)果顯示,LBP具有較高的抗氧化活性,并呈良好的劑量效應(yīng)關(guān)系,其氧化能力略低于或與抗氧化劑抗壞血酸相當(dāng)。并具有較高的金屬離子螯合能力和還原能力,對于脂質(zhì)過氧化和輻射誘導(dǎo)的氧化損傷具有一定的保護(hù)。比較了10種漿果與紅豆越橘的多酚、黃酮和花色苷含量,不同漿果中多酚、黃酮、花色苷含量差異性顯著(p<0.01)。紅豆越橘的多酚、黃酮和花色苷含量在11果中排前4位,同時(shí)對ABTS+?和DPPH?的清除活性也居于前列。

5、r>　　構(gòu)建了輻射誘導(dǎo)的氧化損傷模型,實(shí)驗(yàn)表明,LBP各劑量組可有效的促進(jìn)造血和免疫細(xì)胞增殖和生長,能夠明顯的提高小鼠各臟器中超氧化物歧化酶(SOD)活性,過氧化氫酶(CAT)活性,乳酸脫氫酶(LDH)活性和增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,降低髓過氧化物酶(POM)活性,減少丙二醛(MDA)含量,能夠有效的激活抗氧化酶系,抑制氧化酶系,減少脂質(zhì)過氧化,保護(hù)細(xì)胞膜的損傷,減少微核和染色體畸變率,細(xì)胞周期分布顯示與模型組比較,LBP加藥

6、組使阻滯于G0/G1期的細(xì)胞減少而S期和G2/M期細(xì)胞增多,呈極顯著性差異(p<0.01),細(xì)胞增殖能力得到恢復(fù)。單細(xì)胞凝膠電泳顯示輻射前灌胃LBP,可以有效的較少DNA的損傷,使彗星尾長度明顯減少。透射電鏡再一次證明LBP對脾組織和腸絨毛的保護(hù)作用。
　　研究了LBP對癌細(xì)胞的增殖抑制活性,結(jié)果顯示,11種漿果中紅豆越橘對HT29和HepG2兩種癌細(xì)胞的抑制活性最強(qiáng),藍(lán)靛果對癌細(xì)胞的抑制活性較弱,11種漿果對癌細(xì)胞的抑制活性與其

7、多酚含量沒有顯著的相關(guān)性。進(jìn)一步采用瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證了LBP可以使細(xì)胞膜損傷產(chǎn)生DNA-Ladder碎片,同時(shí)用流式細(xì)胞儀對LBP及順鉑作用后的幾種癌細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞周期分析,用單細(xì)胞凝膠電泳驗(yàn)證了提取物對癌細(xì)胞的DNA損傷程度。結(jié)果顯示,紅豆越橘多酚可以從不同角度誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。建立了體外抗氧化和抗癌細(xì)胞增殖的相關(guān)性,揭示了抗氧化劑的抗氧化、清除ROS作用與其防癌抑癌作用之間存在關(guān)聯(lián),進(jìn)一步證實(shí)了紅豆越橘多酚具有較好的功能活性,對于揭示