丹酚酸A對AngⅡ誘導的大鼠主動脈平滑肌細胞增殖的抑制作用.pdf

1、目的：本實驗選用血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導VSMCs增殖，旨在觀察SA-A對大鼠VSMCs增殖抑制作用，并對其作用機制進行初步探討。為今后SA-A預防和治療動脈粥樣硬化性疾病提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)組織貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細胞( rat aortic smooth muscle cell，RASMCs)，建立RASMCs體外培養(yǎng)模型，在倒置顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察并對培養(yǎng)的3～5代細胞

2、進行平滑肌α-肌動蛋白(SM-αactin)免疫組化鑒定。
　　 (2)實驗分為：正常對照組、AngⅡ組、丹酚酸A組、AngⅡ+丹酚酸A濃度梯度組。
　　 (3)噻唑藍(MTT)比色法觀察細胞增殖情況，免疫印跡實驗(Western blot)測定p-Src，p-Akt(308)，p-Akt(473)激酶活化情況。
　　 結果：
　　 (1)原代培養(yǎng)的VSMCs生長良好，光鏡下呈長梭形及“峰與谷”樣生長。S

3、Mα-actin免疫組化的結果顯示培養(yǎng)的細胞具有典型的VSMCs特征。
　　 (2)MTT結果顯示與對照組相比，AngⅡ能明顯促進VSMCs的增殖。與對照組相比，單用SA-A使VSMCs數(shù)量減少。AngⅡ促進VSMCs增殖的作用能被SA-A所抑制，并且SA-A呈濃度依賴性抑制VSMCs增殖，以100μM作用最為顯著。
　　 (3)Western blot結果顯示給藥組p-Src蛋白表達明顯低于同時間點的AngⅡ組，丹酚酸

4、A能顯著抑制p-Src的活化。
　　 (4)Western blot結果顯示給藥組p-Akt308，p-Akt473蛋白表達明顯低于同時間點的AngⅡ組，SA-A可明顯降低Akt磷酸化水平，并且SA-A降低Akt的磷酸化水平呈濃度依賴性。
　　 結論：
　　 (1)SA-A呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導VSMCs的增殖。
　　 (2)SA-A通過降低p-Src的活化及削弱Akt活化，發(fā)揮抗AngⅡ誘導VSM