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文檔簡介
1、目的： 采用噬菌體抗體庫這一新興生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建天然人源Fab抗體庫。 方法： 收集未免疫的健康人外周血分離淋巴細(xì)胞，提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，通過PCR擴(kuò)增抗體重鏈和輕鏈基因片段，回收700bp左右的目的基因片段，將基因片段連接到噬菌體pComb3中，將構(gòu)建的重組噬菌體載體pComb3電穿孔轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞XL1-Blue構(gòu)建輕鏈文庫，隨后將重鏈基因經(jīng)XhoI和SpeI雙酶切后連到輕鏈質(zhì)粒文庫中，將構(gòu)建的
2、重組噬菌體載體電轉(zhuǎn)化XL1-Blue，經(jīng)輔助噬菌體VCSM13超感染，構(gòu)建非免疫人源Fab噬菌體抗體庫。 結(jié)果： 經(jīng)過輕鏈和重鏈基因的重組和轉(zhuǎn)化，獲得庫容量為1.26×1011pfu/ml的Fab噬菌體抗體庫。 結(jié)論： 本研究構(gòu)建的人天然噬菌體抗體庫為進(jìn)一步篩選特異性抗體提供基礎(chǔ)，也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的-個探索與嘗試。為今后篩選制備抗體提供了技術(shù)平臺和思路，有望為后續(xù)獲得多種有高潛在中和活性的人源抗體打
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