絲裂霉素納米粉針劑的生物相容性與穩(wěn)定性試驗研究.pdf

1、本課題研究的注射用絲裂霉素C(MitomycinC，MMC)-聚氰基丙烯酸正丁酯(polybutylcyanoacrylate，PBCA)納米粒(Iaanoparticle，NP)是一種用于治療肝癌的新型被動靶向制劑。文獻報道尚處于實驗室研究階段，未見其生產(chǎn)和應用于臨床的報道。本研究是在優(yōu)選出制備MMC-PBCA-NP的最佳工藝的基礎上，對MMC-PBCA-NP的純化、滅菌和凍干工藝進行探討；并對制劑的生物相容性和穩(wěn)定性進行了考察。本研

2、究的主要研究方法、內(nèi)容和結論包括以下幾個方面： 論文的第一部分：MMC-PBCA-NP的制備及純化、滅菌和凍干工藝考察：在最佳制備工藝的條件下(投料量分別是：BCA：0.7％(v/v)；Dextran-70：3.5％(w/v)；MMC：0.04％(w/v))，采用乳化聚合法，在室溫下避光磁力攪拌3h得到MMC-PBCA-NP初乳，再用微射流高壓均質機將MMC-PBCA-NP初乳處理成粒徑100nm左右的膠體溶液。微射流機的工作原

3、理是：物料通過均質閥的孔隙時，在高壓下經(jīng)強剪切和沖擊力的作用被瞬間超微破碎、乳化、分散。經(jīng)過幾次循環(huán)，可得到粒徑大小在100nm左右的穩(wěn)定的膠體溶液。透射電鏡下觀察納米粒為光滑圓整的球形，納米粒之間無粘連。光子相關光譜儀(Photon CorrelationSpectroscopy，PCS)測得平均數(shù)均粒徑為102±5.85nm。用紫外分光光度法測得包封率(EE)=85.27±1.50％，載藥量(DL)=6.97±0.14％。然后對制劑

4、的純化、滅菌、干燥工藝進行了考察。試驗結果表明：采用超速冷凍離心法，在4℃時以20000rpm的轉速離心30min，洗滌離心三次能達到很好的純化效果；采用<'60>C。射線滅菌，劑量為6kGy，輻照時間為7.5h可以達到較好的滅菌效果；以5％乳糖為凍干保護劑冷凍干燥樣品可以得到光滑圓整的MMC-PBCA-NP凍干品。 論文的第二部分：MMC-PBCA-NP的生物相容性試驗研究，主要考察了樣品的急性毒性、溶血性和是否含有熱原。采用

5、KM小鼠單劑量尾靜脈注射(iv)MMC-PBCA-NP、MMC和PBCA-NP，觀察14d，記錄其毒性反應情況及死亡數(shù)，計算制劑的LD<,50>。結果：MMC、MMC-PBCA-NP、PBCA-NP的LD<,50>分別是12.2mg.kg<'-1>、52.8mg.kg<'-1>、296.3mg.kg<'-1>；其95％可信區(qū)間分別是8.56～17.4mg.kg<'-1>、47.3～61.6 mg.kg<'-1>和234.2～374.9m

6、g.kg<'-1>。結果表明MMC經(jīng)高分子載體材料PBCA包裹成納米粒后，毒性大大降低，而PBCA毒性很低，與有關文獻報道一致。參照《新藥研究的技術要求》，采用溶血試驗考察了制劑的溶血性，結果表明MMC-PBCA-NP無溶血性。參照《中國藥典》2005版附錄XID進行了熱原檢查，結果表明用該方法制備的MMC-PBCA-NP不含熱原。初步表明該試劑可供靜脈注射用。 論文第三部分：MMC-PBCA-NP的初步穩(wěn)定性研究。采用加速試驗

7、，在溫度40±2℃，濕度75±5％的條件下考察了三批MMC-PBCA-NP凍干品的穩(wěn)定性，一共考察3個月，分別于0、1、2、3月取樣。檢測項目包括性狀、鑒別、檢查、含量測定，具體考察項目為外觀色澤、含量、PH值、粒徑、載藥量、再分散性、再分散后的澄明度等。作為對照，在室溫下考察MMC-PBCA-NP膠體溶液的穩(wěn)定性三個月，考察項目同上。結果：在加速試驗考察期內(nèi)，MMC-PBCA-NP的外觀色澤符合要求，含量沒有降低，PH在規(guī)定范圍內(nèi)，粒