日本血吸蟲rSj14-3-3疫苗和rSjGST疫苗聯(lián)合免疫的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的: 利用成功構(gòu)建好的含有日本血吸蟲重組信號(hào)蛋白14-3-3(rSj14-3-3)和重組Mr26000谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(rSj26GST)編碼基因的菌株E.coli BL21/pET28a,誘導(dǎo)表達(dá)rSj14-3-3和rSj26GST這兩種重組蛋白,并利用其免疫小鼠,觀察日本血吸蟲rSj14-3-3疫苗和rSj26GST疫苗聯(lián)合免疫對(duì)小鼠的保護(hù)作用,同時(shí)觀察日本血吸蟲rSj14-3-3和rSj26GST疫苗聯(lián)合免疫對(duì)小鼠抗病免疫效應(yīng)的

2、研究。
　　方法: 分別復(fù)蘇本實(shí)驗(yàn)室-80℃低溫保種的含有 rSj14-3-3和 rSj26GST編碼基因的菌株E.coliBL21/pET28a,將其均勻涂布于LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培養(yǎng)、收集細(xì)菌、超聲碎菌、分離、親和層析法純化重組蛋白,分別取5μl進(jìn)行SDS-PAGE,觀察純化結(jié)果,采用Bradford法測(cè)定重組蛋白rSj14-3-3和rSj26GST的濃度。將100只6~8周齡BALB/c雌性小鼠隨機(jī)分為

3、A、B、C、D、E5組,每組20只,將兩種純化后的蛋白分別皮下免疫BALB/c小鼠。A組(感染對(duì)照組),于第0周每鼠經(jīng)背部皮下多點(diǎn)注射50μl PBS及等體積福氏完全佐劑(CFA),于第2及4周每鼠皮下多點(diǎn)加強(qiáng)注射50μl PBS加等體積福氏不完全佐劑(IFA)。B組(rSj14-3-3組),每鼠于第0、2、4周經(jīng)皮下注射100μg(50μl)rSj14-3-3。C組(rSj26 GST組),每鼠于第0、2、4周經(jīng)皮下注射100μg(5

4、0μl)rSj26 GST。D組(rSj14-3-3+rSj26 GST聯(lián)合免疫組),于第0、2、4周經(jīng)背部皮下多點(diǎn)注射rSj14-3-3和rSj26 GST各50μg(25μl)。上述各組分別于末次免疫2周后每鼠經(jīng)腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴(30±2)條。E組(對(duì)照組)未作任何處理。于感染45d后剖殺全部小鼠,眼眶取血,用于血清纖維化指標(biāo)檢測(cè);計(jì)數(shù)成蟲及肝內(nèi)蟲卵,計(jì)算各組間的減蟲率和減卵率;將小鼠肝組織做成切片進(jìn)行HE染色,測(cè)量各組單

5、卵肉芽腫大小。
　　結(jié)果: 成功誘導(dǎo)表達(dá)rSj14-3-3和rSj26GST這兩種重組蛋白,并對(duì)其進(jìn)行純化,經(jīng)鑒定純化結(jié)果較好。聯(lián)合免疫組的減蟲率為38.4％,顯著高于rSj14-3-3(19.8%)和rSj26GST組(21.6%)(P值均<0.01)。聯(lián)合免疫組以及rSj14-3-3、rSj26GST組減卵率分別為48.8%、35.3%、41.4%;聯(lián)合免疫組及rSj14-3-3和rSj26GST組,肝組織中每條雌蟲平均產(chǎn)卵數(shù)

6、顯著低于感染對(duì)照組(P值均<0.01)。聯(lián)合疫苗組小鼠蟲卵肉芽腫的直徑為(173.9±35.0um),顯著小于感染對(duì)照組的(267.7±28.6um)(P值<0.01)。檢測(cè)各組的透明質(zhì)酸和層黏連蛋白水平,聯(lián)合免疫疫苗組顯著低于感染對(duì)照組(P值<0.01),他們均高于正常對(duì)照組。
　　結(jié)論: 成功誘導(dǎo)表達(dá)rSj14-3-3和rSj26GST重組蛋白,并成功獲得他們純化后的重組蛋白。聯(lián)合免疫組的保護(hù)作用優(yōu)于rSj14-3-3和rSj