日本血吸蟲雙基因分泌型表達(dá)疫苗pIRES-Sj14-Sj26的構(gòu)建及其保護性免疫的研究.pdf

1、目的:構(gòu)建日本血吸蟲雙基因分泌型表達(dá)DNA疫苗pIRES-Sj14-Sj26,并根據(jù)初期動物實驗,初步判斷此重組DNA疫苗是否具有保護性的免疫效果,從而為日本血吸蟲病的防治提供新的疫苗候選分子。
　　方法:采用分子克隆技術(shù),以pVAC作為過渡載體,分別在日本血吸蟲脂肪酸結(jié)合蛋白(Sj14)和GST(Sj26)的抗原基因編碼序列的5’端添加IL-2的信號序列,然后依次將兩個修飾基因克隆入真核表達(dá)載體pIRES上,構(gòu)建得到分泌型表達(dá)D

2、NA疫苗pIRES-Sj14-Sj26。隨后,購買60只BALB/c小鼠進行下一步的動物實驗。將60只BALB/c小鼠分為三組,每組20只,設(shè)置陰性對照和空白對照。然后用重組DNA疫苗、生理鹽水和pIRES空載體分別于第0、3、5周直接注射免疫各組BALB/c小鼠,末次免疫2周后,每組取小鼠10只,眼球取血并斷頸處死,分離小鼠血清,取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞進行免疫原性研究。各組余下小鼠經(jīng)腹部感染40土1條尾蚴。尾蚴攻擊感染45天后,對

3、各組的BALB/c小鼠進行成蟲和蟲卵檢測。初步判斷該重組DNA疫苗在血吸蟲感染過程中對小鼠的免疫保護作用。
　　結(jié)果:通過PCR結(jié)果鑒定,MluⅠ、NheⅠ和NotⅠ、SalⅠ雙酶切鑒定以及RT-PCR檢測重組質(zhì)粒pIRES-Sj14-Sj26在子宮頸癌(Hela細(xì)胞)中的表達(dá),表明該重組表達(dá)疫苗構(gòu)建成功。免疫小鼠后,經(jīng)ELISA法檢測抗體的結(jié)果表明,pIRES-Sj14-Sj26與各對照組比較,能夠產(chǎn)生誘導(dǎo)高水平的IgG抗體(P

4、<0.01,P<0.05).其IFN-γ的水平與空白對照組和空載體組比較也有顯著差異(P<0.01),但是該組的脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)較各對照組未有顯著增高(P>0.05).此外,該組NO含量較對照組也有明顯提高(P<0.01)。尾蚴攻擊感染的結(jié)果顯示,小鼠的減蟲率和減卵率較對照組也有明顯增高(P<0.01,P<0.05)。
　　結(jié)論:根據(jù)初期動物實驗的結(jié)果,我們可以初步判定,該分泌型重組DNA疫苗pIRES-Sj14-Sj26具有較