日本血吸蟲病表位疫苗研究.pdf

1、摘要本文著重于舊本血吸蟲(S.japonicum)表位疫苗的研究,包括以下兩個(gè)部分:一日本血吸蟲有效抗原表位的篩選.結(jié)果表明,獲得了3種SjFer抗原表位,它們都具有部分的免疫保護(hù)性.分離鑒定日本血吸蟲85kDa金屬蛋白酶的模擬表位,并探討其對(duì)小鼠的免疫保護(hù)效果.二日本血吸蟲多表位疫苗的構(gòu)建和免疫保護(hù)效果研究,構(gòu)建多表位日本血吸蟲DNA疫苗,探討其對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性.結(jié)果表明,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pcDNA/Sjpt(pt為polytop

2、e的縮寫),雙酶切片斷與預(yù)期大小一致,測(cè)序結(jié)果表明插入片斷與設(shè)計(jì)序列完全一致;pcDNA/Sjpt在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的蛋白包括了全部4個(gè)片斷,且均具有抗原性.構(gòu)建日本血吸蟲重組表位蛋白疫苗,并探討其對(duì)小鼠的保護(hù)性免疫.結(jié)果表明成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX/Sjpt;重組質(zhì)粒雙酶切片斷與預(yù)期大小一致,測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)序列一致;轉(zhuǎn)化菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)產(chǎn)物與預(yù)期的大小一致,經(jīng)Western blot分析,表達(dá)產(chǎn)物具有良好的抗原性;重組蛋

3、白能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體和部分的免疫保護(hù)力,減蟲率和減卵率分別為35.2％和41.9％,與佐劑組相比差異顯著(P值均小于0.001).觀察合成表位多肽疫苗誘導(dǎo)的抗日本血吸蟲的體液免疫應(yīng)答.結(jié)果表明,這4個(gè)合成表位多肽具有良好的抗原性和免疫原性,與KLH連接后能誘導(dǎo)明顯的抗體反應(yīng)和顯著的細(xì)胞毒作用.該研究對(duì)日本血吸蟲候選抗原分子31和32 kDa聯(lián)合免疫山羊的保護(hù)效果進(jìn)行了探討.研究表明,日本血吸蟲候選抗原分子31和32 kDa能誘導(dǎo)山