重組SjP38抗原診斷日本血吸蟲病的研究.pdf

1、血吸蟲病是當(dāng)今最重要的公共衛(wèi)生疾病之一，全世界有2億人口被感染，其中有1.2億患者。血吸蟲病的主要危害在于蟲卵所分泌的可溶性蟲卵抗原(SEA)導(dǎo)致的肉芽腫病變，患者在晚期時(shí)易引起肝脾腫大，門脈高壓和腹水，喪失勞動(dòng)力，甚至失去生命。因此，實(shí)現(xiàn)早期診斷，成為血吸蟲病防治工作的重點(diǎn)。 血吸蟲病常用診斷方法主要有病原學(xué)和免疫學(xué)方法。傳統(tǒng)的病原學(xué)方法有較高特異性但敏感性較差，而且多數(shù)病原學(xué)方法操作繁瑣，不利于普查。相對而言，免疫學(xué)方法是血

2、吸蟲病診斷的發(fā)展方向，目前存在的主要問題是：1)診斷用抗原、抗體的大批量來源及其質(zhì)量監(jiān)控問題；2)循環(huán)抗體(CAb)檢測和循環(huán)抗原(CAg)檢測各有利弊，臨床方法以檢測IgG抗體的存在為主，但難以區(qū)分現(xiàn)癥與既往感染；3)早期診斷的效果不理想；4)診斷方法的進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)化、簡易快速化、產(chǎn)業(yè)化而真正面向基層與現(xiàn)場。 P38蛋白是SEA中分子量約為38kD的分子，大量實(shí)驗(yàn)證明曼氏血吸蟲天然和重組P38蛋白具有良好的免疫原性，具有潛在的抗

3、病免疫和診斷應(yīng)用價(jià)值。在本研究室先前的工作中，周曉紅等通過可溶性蟲卵(SEA)與感染兔血清Western-blot實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在38kD左右蛋白能識別4周血清；表明該蛋白參與早期免疫反應(yīng)。由于天然SjP38蛋白來源有限，且純化過程繁瑣。本室已經(jīng)克隆了日本血吸蟲主要蟲卵P38基因(SjP38)的編碼序列，本研究則進(jìn)一步深入研究重組SjP38蛋白(rSjP38)的表達(dá)、純化和rSjP38單克隆抗體的制備及其在血吸蟲病診斷中的應(yīng)用。 目

4、的： 1.檢驗(yàn)SjP38在感染早期的免疫反應(yīng)及其作為診斷靶抗原的可行性。 2.初步建立一種以SjP38單抗為基礎(chǔ)的日本血吸蟲病膠體金免疫層析的診斷方法。 結(jié)論： 1.在大腸桿菌中以可溶形式表達(dá)SjP38基因片段，證實(shí)rSjP38蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性和早期診斷應(yīng)用前景。 2.制備了8株抗rSjP38蛋白的單克隆抗體，經(jīng)鑒定8株單抗均能識別天然SjP38蛋白。 3.根據(jù)雙抗夾心法和間接法原