微小隱孢子蟲表面抗原CP23基因、CP15-60-23復合基因載體的構建、表達及其保護性的研究.pdf

1、隱孢子蟲(Cryptosporidium)是一種屬于頂端復合物門的寄生性原蟲，是Tyzzer于1907年首先在實驗小鼠胃腸道內發(fā)現(xiàn)的(小鼠隱孢子蟲)。隱孢子蟲有許多種類，其有效蟲種有10種，對人和大多數(shù)脊椎動物造成感染的主要是Tyzzer于1912年發(fā)現(xiàn)的另一種蟲種微小隱孢子蟲(C.parvum)。隱孢子蟲感染引起的隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)是一種全球性的人畜共患寄生蟲病，但直至80年代以后才逐漸引起重視。免疫力正

2、常的人感染隱孢子蟲后，雖可引起急性腹瀉，但常為自限性;免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者(如嬰幼兒、艾滋病患者、營養(yǎng)不良者、器官移植后、腫瘤患者等)感染此蟲后，則可引起嚴重胃腸炎并伴有水樣腹瀉，導致大量體液丟失而危及生命。該病已被確定為引起人腹瀉的六大病因之一。在艾滋病(AIDS)患者中感染率高達48％左右，長期的嚴重腹瀉，是艾滋病病人的重要致死因素之一。該蟲致病力較強，小劑量(50％感染劑量ID50為132個卵囊)的微小隱孢子蟲卵囊

3、足以引起血清呈陰性的健康自愿受試者感染。由于隱孢子蟲卵囊體積微小(直徑4-6μm)、分布廣泛，常規(guī)氯化飲水消毒方法不能將其殺滅，故對人類公共衛(wèi)生造成很大威脅。國外暴發(fā)流行時有報告，多發(fā)生于病人或病牛接觸后的人群，或幼兒園和托兒所等集體單位。據(jù)估計，發(fā)生在美國威斯康星州(Wisconsin)密爾沃基(Milwaukee)的那次暴發(fā)中，超過400，000居民染上了水樣腹瀉，致死100多人，危害非常大。所以，隱孢子蟲病成為目前各國重點研究的寄

4、生蟲病之一。我國自1987年南京報道首例隱孢子蟲病以來，江蘇、浙江、安徽、福建、內蒙古、云南、四川、山東及上海等省市均已證實有該病存在，其感染率為1.4％-13.3％。自從發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲以來，許多研究者一直致力于該病的防治研究，但迄今為止，對該病尚無有效的防治措施，因此對該病的早期診斷、治療以及研究防治該病的疫苗就顯得尤為重要。正確的早期診斷能及時控制該病的流行蔓延，減少損失，最大限度減少病人的死亡。目前，實驗室鑒定和檢測隱孢子蟲的主要方

5、法有消化道粘膜活檢法、體外培養(yǎng)法、病原學檢查法、免疫學檢查法及分子生物學檢查法。這些方法或者給病人帶來痛苦(消化道粘膜活檢法)，或者費時費力難以控制(體外培養(yǎng)法)，或者敏感性和特異性不高(病原學檢查法)，或者需要特殊的儀器設備難以在基層推廣應用(分子生物學檢查法)。作為免疫學檢查法之一的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，操作簡便，不需要特殊儀器設備，易于標準化，經(jīng)濟，特別是應用堿性磷酸酶標記，催化速度快，穩(wěn)定性高，容易交聯(lián)，底物穩(wěn)定，檢測

6、本底低。國內外學者應用ELISA在隱孢子蟲診斷應用方面進行了大量的嘗試，取得了一定成果。然而，因隱孢子蟲與其它原蟲一樣，抗原成分復雜，真正有診斷意義的抗原成分在整個蟲體中占的比例較少；并且隱孢子蟲蟲體小，獲取高純度的蟲體抗原較難等因素影響了檢測的敏感性和特異性，限制了其實際應用。因此，解決隱孢子蟲特異抗原的問題成為解決隱孢子蟲的檢測與診斷的關鍵技術問題。 本研究利用分子生物學技術，將編碼表面抗原CP23和CP15/60的基因構建