重組人血清白蛋白-干擾素α2b融合蛋白的研究.pdf

1、研究目的:利用人血清白蛋白融合技術(shù),制備一種在體內(nèi)半衰期長,生物學活性高的長效研究重組人血清白蛋白.干擾素α 2b融合蛋白,用于病毒性肝炎,腫瘤等相關(guān)疾病的治療. 研究方法: 1.重組人血清白蛋白-干擾素α2b融合蛋白(rHSA/IFNα 2b)酵母高表達菌株的構(gòu)建,包括人血清白蛋白融合和干擾素α 2b基因的獲得,重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建,畢赤酵母表達菌株的轉(zhuǎn)化,篩選. 2.重組人血清白蛋白-干擾素α 2b融合蛋白酵母

2、高表達菌株發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化. 3.畢赤酵母表達重組人血清白蛋白-干擾素α 2b融合蛋白純化方法的研究. 4.通過SDS-PAGE,等電聚焦,蛋白質(zhì)雜交,氨基酸末端序列分析,質(zhì)譜分析,肽譜,圓二色譜(CD)以及體外生物活性等方法對畢赤酵母表達的rHSA/IFN α 2b進行結(jié)構(gòu)鑒定. 5.在食蟹猴體內(nèi)進行藥物動力學及藥效動力學研究,檢測動物體內(nèi) rHSA/IFN α2b 后血清濃度隨時間變化情況以及血清2′,

3、5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-OAS)的變化,并與普通IFNα2b 進行比較.并研究多次給藥后rHSA/IFNα 2b的免疫原性情況. 結(jié)論: 1.rHSA/IFNa2b融合蛋白在畢赤酵母系統(tǒng)中得到了高效表達,罐上表達量大于400mg/L.表達產(chǎn)物經(jīng)多種物理,化學和生物學方法研究證明結(jié)構(gòu)正確,樣品制備工藝切實可行,純化總體收率>20﹪,最終產(chǎn)品質(zhì)量符合臨床研究要求. 2.食蟹猴體內(nèi)進行藥物動力學及藥效動力學