As2O3對(duì)人胰腺癌細(xì)胞p16、c-myc基因表達(dá)變化的影響.pdf

1、目的：
　　 胰腺癌(pancreatic cancer)是一種較常見(jiàn)的惡性腫瘤,在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì),其發(fā)病率高,生長(zhǎng)快。目前仍以手術(shù)為主要治療手段,但手術(shù)治愈率低,90％的病人在診斷后一年內(nèi)死亡,5年生存率僅1%～3%。因此,尋找一種有效的治療藥物對(duì)于胰腺癌患者來(lái)說(shuō)具有重要意義。As2O3是傳統(tǒng)中藥砒霜的有效成分,作為抗腫瘤藥用于治療白血病獲得成功以來(lái),人們將As2O3用于實(shí)體腫瘤,并取得顯著療效;人類(lèi)腫瘤的發(fā)生、

2、發(fā)展與組織細(xì)胞內(nèi)基因的變化有密切的關(guān)系,癌基因的激活和抑癌基因的失活,以及它們之間的協(xié)同或拮抗作用在細(xì)胞分裂生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮重要作用;目前認(rèn)為As2O3抗腫瘤的機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化有關(guān),但As2O3誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞中基因表達(dá)或失活的研究較少。
　　 本研究以人胰腺癌PANC-1細(xì)胞作為研究對(duì)象,采用不同終濃度的As2O3處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞,觀察其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖的影響;比較As2O3作用48小時(shí)前后抑癌基因p16

3、和原癌基因c-myc表達(dá)的變化,從分子水平探討As2O3對(duì)胰腺癌的作用機(jī)制,為胰腺癌新的治療方案提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 MTT法檢測(cè)As2O3對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響。處理組用終濃度為2gμmol/L、1μmol/L、0.5μmaol/L的As2O3加入人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中,空白對(duì)照組不加藥物,作用48h后,采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中抑癌基因p16和原癌基

4、因c-myc在As2O3處理前后mRNA水平的表達(dá)情況,采用免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)As2O3處理前后抑癌基因p16和原癌基因c-myc蛋白水平的表達(dá)情況。用Quantity One軟件測(cè)量目的條帶灰度積值與內(nèi)參條帶灰度積值的比,進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果：
　　 (1)As2O3對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響
　　 在濃度為0.5μmol/L時(shí),隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞抑制率之間

5、的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),而在1.0μmol/L-2.0μmol/L濃度時(shí),隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞抑制率逐漸增加(P＜0.05);在作用時(shí)間相同時(shí),隨著藥物濃度從0.5μmol/L到2.0μmol/L增加,抑制率也逐漸增加(P＜0.05)。As2O3在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用具有時(shí)間和劑量效應(yīng)。
　　 (2)As2O3對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中p16、c-myc mRNA的影響
　　 半定量RT-

6、PCR分析人胰腺癌PANC-1中目的基因p16和c-myc mRNA表達(dá),結(jié)果表明As2O3處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞48h后,隨著AS2O3作用濃度的增加,抑癌基因p16 mRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng),而原癌基因c-myc mRNA表達(dá)逐漸減弱?？瞻讓?duì)照組和不同濃度As2O3作用人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的處理組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),不同濃度As2O3作用人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的處理組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

7、。
　　 (3)As2O3對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中P16、c-myc蛋白水平的影響
　　 Western Blot分析人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中目的基因P16、c-myc蛋白水平表達(dá),結(jié)果表明As2O3處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞48h后,隨著As2O3作用濃度的增加,P16蛋白表達(dá)是逐漸增強(qiáng)的,而c-myc蛋白表達(dá)逐漸減弱?？瞻讓?duì)照組和不同濃度As2O3作用人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的處理組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P