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文檔簡(jiǎn)介
1、目的：構(gòu)建攜帶SMO靶向siRNA慢病毒表達(dá)載體，并證實(shí)其對(duì)胰腺癌細(xì)胞中SMO基因表達(dá)的抑制作用。
方法：設(shè)計(jì)并合成3條SMO基因靶向siRNA片段，利用基因重組技術(shù)構(gòu)建攜帶此3條片段的慢病毒表達(dá)載體并測(cè)定其滴度，構(gòu)建好的慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞株SW1990后，采用RT-PCR法檢測(cè)SMO基因的表達(dá)以篩選出效果最佳的干擾表達(dá)載體，并以此載體轉(zhuǎn)染SW1990細(xì)胞后采用Western blot法檢測(cè)SMO蛋白表達(dá)。
2、 結(jié)果：基因測(cè)序與酶切電泳結(jié)果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正確插入慢病毒表達(dá)載體，無(wú)堿基缺失錯(cuò)排與突變，測(cè)定病毒滴度分別為5.31×108TU/ML，1.49×109TU/ML及8.50×108TU/ML，經(jīng)轉(zhuǎn)染SW1990細(xì)胞后，測(cè)定對(duì)SMO基因表達(dá)的抑制率分別為86.00％，74.85%及19.22%，效果最優(yōu)的干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SW1990細(xì)胞后對(duì)SMO蛋白表達(dá)的抑制率>80%。
結(jié)論：成功構(gòu)建攜帶SMO基因
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