MBD2對胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響.pdf

1、研究目的：
　　探究甲基化CpG結(jié)合域蛋白2（Methyl-CpG binding domain protein2, MBD2）在人胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，以及其對胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響，并探究其作用的可能分子機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.采取熒光定量PCR和Western blot檢測MBD2在三種人胰腺細(xì)胞株中的表達(dá)。
　　2.根據(jù)MBD2 shRNA的序列，構(gòu)建MBD2 shRNA干擾質(zhì)粒pLKO

2、.1-sh-MBD2(MBD2 shRNA)，并在mRNA和蛋白水平鑒定其干擾效果；將MBD2的CDS區(qū)序列克隆至真核表達(dá)載體p3xFLAG-CMV-24，構(gòu)建MBD2的過表達(dá)質(zhì)粒3xFlag-MBD2，并在mRNA和蛋白水平鑒定MBD2過表達(dá)效果。
　　3.將干擾質(zhì)粒MBD2 shRNA轉(zhuǎn)入高表達(dá)MBD2的胰腺癌細(xì)胞株P(guān)aTu8988和SW1990，將過表達(dá)載體3xFlag-MBD2轉(zhuǎn)入低表達(dá)MBD2的BxPC3細(xì)胞，采用CCK

3、8法、克隆形成實驗、Transwell遷移和侵襲實驗檢測MBD2對胰腺癌細(xì)胞株增殖、遷移和侵襲的影響。
　　4.將干擾質(zhì)粒MBD2 shRNA轉(zhuǎn)入高表達(dá)MBD2的胰腺癌細(xì)胞株P(guān)aTu8988和SW1990，將過表達(dá)載體3xFlag-MBD2轉(zhuǎn)入低表達(dá)MBD2的BxPC3細(xì)胞，Western blot檢測EMT主要指標(biāo)蛋白、轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP2和MMP9的變化及Hippo信號通路相關(guān)蛋白水平的變化。
　　研究結(jié)果：
　　

4、1.MBD2差異性表達(dá)于3種胰腺癌細(xì)胞株，在PaTu8988細(xì)胞中表達(dá)相對最高， SW1990細(xì)胞次之，而BxPC3細(xì)胞中MBD2的表達(dá)水平相對最低。
　　2．菌液PCR、重組質(zhì)粒雙酶切及上海生工測序鑒定結(jié)果表明， MBD2 shRNA和3xFlag-MBD2質(zhì)粒構(gòu)建成功。
　　3．本實驗所構(gòu)建的MBD2 shRNA質(zhì)粒能夠有效地抑制胰腺癌PaTu8988和SW1990細(xì)胞中MBD2的表達(dá)；本實驗所構(gòu)建的3xFlag-MBD

5、2質(zhì)粒能夠高效地在BxPC3細(xì)胞中過表達(dá)MBD2。
　　4.與對照組對比，下調(diào)MBD2的表達(dá)后，PaTu8988和SW1990細(xì)胞的增殖率、克隆形成率、遷移率及侵襲率均減少。相反，上調(diào)MBD2的表達(dá)后，BxPC3細(xì)胞增殖率、克隆形成率、遷移率及侵襲率均增加。
　　5.下調(diào)MBD2的表達(dá)后，PaTu8988和SW1990細(xì)胞的EMT能力減弱，MMP2和MMP9的蛋白表達(dá)水平降低，Hippo信號通路中Mst1、Mst2、p-Mo

6、b1、p-Lats1、p-Yap蛋白表達(dá)量明顯升高，Yap蛋白表達(dá)量明顯降低；相反，上調(diào)MBD2的表達(dá)后，BxPC3細(xì)胞的EMT能力增強(qiáng)，MMP2和MMP9的蛋白表達(dá)水平增加，Hippo信號通路中Mst1、Mst2、p-Mob1、p-Lats1、p-Yap蛋白表達(dá)量明顯降低，Yap蛋白表達(dá)量明顯升高。
　　研究結(jié)論：
　　MBD2可能通過調(diào)控Hippo信號通路促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)功能，具體作用機(jī)制需要更深入