DEV感染對鴨主要TLRs轉錄水平影響研究.pdf

1、鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)又稱鴨瘟病毒(Duck plague virus，DPV)，是危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要病原之一。目前對DEV的研究主要集中在基因結構與功能、快速檢測技術及誘導特異性免疫應答反應等方面，但在 DEV感染與鴨天然免疫應答方面研究較少。Toll樣受體(Toll like receptors，TLRs)作為一種天然免疫分子，可通過機體自身的表面模式識別受體識別病原微生物的損傷相關分子

2、模式并激活胞內(nèi)信號傳導，誘導炎性因子以及細胞因子的產(chǎn)生，最終達到清除入侵病原體的目的。因此，本文開展了DEV感染對鴨TLRs基因轉錄和細胞因子分泌的影響研究，以期為鴨病毒性腸炎(鴨瘟)的預防與控制提供新思路。主要研究內(nèi)容包括：
　　1．健康鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因的相對轉錄水平
　　根據(jù)GenBank上鴨TLR2、TLR3、TLR7和β-actin基因設計特異性引物，以β-actin為內(nèi)參，采用實時熒光定量P

3、CR對鴨機體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉錄量進行檢測分析，結果發(fā)現(xiàn)：TLR2、TLR3和TLR7基因 mRNA在所檢測組織中均有不同程度轉錄，其中TLR2基因在脾臟中轉錄最高，依次是肝臟、胰臟、腎臟、氣管、肺臟、十二指腸、肌肉、心臟和腦；TLR3基因在肝臟中轉錄最高，依次是腎臟、脾臟、氣管、心臟、肺臟、胰臟、肌肉、十二指腸和腦；TLR7基因在脾臟中轉錄最高，依次是肝臟、胰臟、肺臟、氣管、十二指腸、腎臟、肌肉和腦。
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4、．DEV感染對鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因轉錄的影響
　　采集DEV感染后不同時間段鴨組織樣本，提取組織樣本總RNA，采用實時熒光定量PCR對鴨機體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉錄量進行檢測分析，結果發(fā)現(xiàn)：與正常組相比較，TLR2、TLR3和TLR7基因在鴨體不同組織中轉錄均發(fā)生不同程度變化，其總體趨勢是，隨著DEV感染時間的推進，三種Toll樣基因轉錄呈現(xiàn)倒“S”變化，即先升高后降低再升高的現(xiàn)象，但Toll樣

5、受體基因在同一感染時間上不同鴨體組織的轉錄變化未呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。
　　3．DEV感染對鴨血清和外周淋巴細胞中細胞因子分泌的影響
　　采集DEV感染后不同時間段鴨血清樣本，采用ELISA測定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量，結果發(fā)現(xiàn)：DEV感染后鴨血清中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化，其中IL-2在6h時最高，120h時最低；IL-6在72h前趨于穩(wěn)定，

6、96h時降到最低；IL-8在6h時最高，96h時最低；IFN-β開始時降低，6~48h時升高，后又降低，至96h時開始上升；IFN-γ在6h時最高，18~120h時呈整體下降趨勢，至168h時升高。
　　分離健康鴨血液中外周淋巴細胞，培養(yǎng)呈單層細胞后，感染 DEV，收集感染后不同時間細胞樣本，采用ELISA方法測定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量，結果發(fā)現(xiàn)：DEV感染后鴨外周淋巴細胞中IL-2、IL-6、I

7、L-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化，其中IL-2和IL-6呈現(xiàn)持續(xù)上升，至4h后分泌趨于穩(wěn)定；IL-8在1h時開始下降，4h時上升至最高，8h時下降，12h上升；IFN-β在1h時開始上升，4~8h時持續(xù)下降，12h時上升；IFN-γ在1h時無變化，4h時上升，8h時下降，12h時上升。
　　結論：TLR2、TLR3和TLR7基因在正常鴨組織中具有不同程度的轉錄，感染DEV后其轉錄水平發(fā)生一定的變化，總體趨勢沒