激素替代治療對(duì)膿毒癥合并相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全大鼠血清抗炎因子IL-10濃度的影響.pdf

1、目的：膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥、膿毒癥休克以及相繼出現(xiàn)的多器官功能障礙綜合癥是危重病患者死亡最常見的原因。多篇文獻(xiàn)報(bào)道危重病患者相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全的總體發(fā)病率為30％～40％，而膿毒癥休克患者可達(dá)50％～60％。相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全（relative adrenal insuffi-ciency， RAI）時(shí)皮質(zhì)醇水平可能較正常升高，但相對(duì)于疾病的嚴(yán)重程度而言仍相對(duì)不足。外源性的糖皮質(zhì)激素（glucocorticoids，GC）可以作用

2、于下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPAA）的各個(gè)層面，使血漿皮質(zhì)醇濃度上升，從而對(duì)應(yīng)激反應(yīng)起到一個(gè)內(nèi)在的調(diào)節(jié)作用，使機(jī)體通過多種機(jī)制對(duì)危重病患者起保護(hù)作用。IL-10是一個(gè)調(diào)節(jié)造血細(xì)胞功能的多功能細(xì)胞因子，其主要功能是限制和最終清除炎癥反應(yīng)，但有關(guān)地塞米松對(duì)膿毒癥合并RAI的IL-10水平的影響仍不清楚。本研究觀察不同時(shí)間、應(yīng)用相同劑量（小劑量）地塞米松，觀察膿毒癥合并相

3、對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全的大鼠血清白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）水平的變化，以期為臨床積極治療膿毒癥提供有利的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：動(dòng)物膿毒癥模型采用盲腸結(jié)扎穿孔法（cecal ligation and puncture，CLP）復(fù)制，小劑量促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）刺激試驗(yàn)評(píng)價(jià)膿毒癥動(dòng)物的腎上腺皮質(zhì)功能。隨機(jī)選取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，選擇健康雄性清潔級(jí)w

4、istar大鼠155只（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證書編號(hào)：607123），體重250～300 g，隨機(jī)分為5組：（1）正常對(duì)照組（n=10）；（2）假手術(shù)組（n=25）：僅打開腹腔不做CLP；（3）模型組（n=50）：僅做CLP；（4）預(yù)防組（n=50）：CLP術(shù)前即刻腹腔注射地塞米松10mg/kg；（5）治療組（n=20）：CLP術(shù)后7h腹腔注射地塞米松10mg/kg。第（2）、（3）、（4）組設(shè)CLP術(shù)后2h、4h、6h、8h、12h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)

5、，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只大鼠（假手術(shù)組5只），第（4）組僅8h、12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)。各組大鼠均按時(shí)間點(diǎn)采血，留取血清，-70℃凍存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定血清IL-10濃度。所有大鼠均于CLP術(shù)后6h腹腔注射ACTH0.8μg/kg，于注射前、注射后30min由頸總動(dòng)脈測(cè)壓管采血，分別記做T0、T30，留取血清，-70℃凍存，采用液相平衡放射免疫分析法（radi

6、oimmunoassay，RIA）測(cè)定血清皮質(zhì)醇濃度。將T30與T0的差值記做△T。若△T小于0則認(rèn)為是相對(duì)腎上腺功能不全。隨機(jī)選取相同環(huán)境下飼養(yǎng)的正常大鼠2只，模型組、治療組12h大鼠各2只，于CLP術(shù)后12h應(yīng)用1％多聚甲醛行主動(dòng)脈灌注固定，取下丘腦、垂體、腎上腺做電鏡切片觀察組織超微結(jié)構(gòu)變化。按ACTH刺激試驗(yàn)結(jié)果將所有大鼠分為伴有RAI和不伴有RAI兩部分。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±

7、s）表示，伴有RAI和不伴有RAI的各組均數(shù)的比較行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、各組大鼠血清平均IL-10濃度比較
　　 假手術(shù)組血清IL-10濃度高于正常對(duì)照組（21.05±6.59 vs16.67±2.06pg/ml，P>0.05）。模型組血清IL-10濃度明顯高于假手術(shù)組（31.45±8.61pg/ml vs21.05±6.59pg/ml，P<0.01）。

8、r>　　 地塞米松預(yù)防組大鼠血清中IL-10濃度明顯高于模型組，（39.18±12.85pg/ml vs31.45±8.61pg/ml， P<0.05）：地塞米松治療組大鼠血清中IL-10濃度高于模型組，兩者比較無差異性（33.25±7.07pg/ml vs31.45±8.61pg/ml，P>0.05）。地塞米松預(yù)處理組大鼠血清中IL-10濃度明顯高于治療組（39.18±12.85pg/ml vs33.25±7.07pg/ml， P<

9、0.05）
　　 2、各組大鼠血清IL-10濃度隨時(shí)間的變化
　　 假手術(shù)組大鼠血清IL-10濃度在4小時(shí)達(dá)高峰，預(yù)防組大鼠血清IL-10濃度在8小時(shí)達(dá)高峰，較假手術(shù)組、模型組延遲。模型組大鼠血清IL-10濃度在6小時(shí)達(dá)高峰，其中2小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)與12小時(shí)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3、預(yù)防組、模型組、治療組并發(fā)與不并發(fā)RAI大鼠血清IL-10濃度的變化
　　 膿毒癥并發(fā)RAI大鼠

10、地塞米松預(yù)防組血清IL-10濃度明顯高于模型組（40.48±12.52ng/ml vs32.17±8.24ng/ml，P<0.05）和治療組（40.48±12.52 ng/ml vs34.88±10.78ng/ml，P<0.05），而治療組中合并RAI大鼠血清IL-10濃度與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（34.88±10.78ng/ml vs32.17±8.24ng/ml，P>0.05）。
　　 膿毒癥未合并RAI的大鼠地塞米松預(yù)

11、防組、治療組、模型組IL-10濃度均高于假手術(shù)組（分別為37.41±13.45ng/mlvs16.67±2.06ng/ml， P<0.05；31.63±6.54ng/ml vs16.67±2.06ng/ml， P<0.05；30.58±9.18ng/ml vs16.67±2.06ng/ml，P<0.05），預(yù)防組IL-10濃度高于模型組（37.41±13.45 ng/ml vs30.58±9.18， P<0.05）。
　　 預(yù)防

12、組、治療組和模型組中合并RAI大鼠IL-10濃度與未合并RAI大鼠差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 4、下丘腦、垂體、腎上腺皮質(zhì)電鏡下結(jié)構(gòu)的改變
　　 模型組、預(yù)防組和治療組大鼠下丘腦室旁核細(xì)胞、垂體ACTH細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞均出現(xiàn)脂質(zhì)耗減、髓鞘樣小體以及管泡狀嵴的線粒體嵴和膜部分或全部溶解消失的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，且腎上腺結(jié)構(gòu)改變較下丘腦與垂體變化明顯，以模型組為著。
　　 結(jié)論：
　　

13、本實(shí)驗(yàn)采用CLP法可成功復(fù)制由腹腔感染導(dǎo)致的膿毒癥大鼠動(dòng)物模型，將ACTH刺激試驗(yàn)用于膿毒癥大鼠動(dòng)物模型，并通過觀察下丘腦、垂體、腎上腺的電鏡切片判斷HPAA的功能不全是否伴隨結(jié)構(gòu)改變，從而得出以下結(jié)論：
　　 1、成功制備了膿毒癥合并RAI大鼠動(dòng)物模型，即膿毒癥大鼠存在相對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能不全（RAI），從基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究方面進(jìn)一步證實(shí)膿毒癥大鼠RAI的發(fā)生基礎(chǔ)。
　　 2、感染可引起膿毒癥大鼠血清IL-10濃度升高。

14、>　　 3、地塞米松可以提高大鼠血清中IL-10濃度，以預(yù)防性應(yīng)用效果顯著。
　　 4、膿毒癥早期患鼠是否合并RAI，對(duì)其IL-10的濃度沒有影響。
　　 5、預(yù)防性地塞米松可以提高膿毒癥早期合并RAI與未合并RAI大鼠血清IL-10的水平，但是否合并RAI，應(yīng)用地塞米松治療對(duì)其IL-10的濃度沒有影響。
　　 6、下丘腦、垂體、腎上腺在毒癥大鼠存在時(shí)均出現(xiàn)代謝性結(jié)構(gòu)改變，以腎上腺皮質(zhì)表現(xiàn)最明顯，可能是產(chǎn)生相對(duì)