建立檢測血清IgG4水平的ELISA體系及探討SMSs在SLE發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分:建立檢測血清IgG4水平的ELISA體系及其臨床應(yīng)用
　　目的:建立一種特異、靈敏的定量檢測人血清中IgG4濃度的雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)方法,并探討其在自身免疫性疾病中的臨床應(yīng)用。
　　方法:(1)檢測血清IgG4水平的ELISA體系的建立:①用鼠抗人IgG4抗體包被ELISA板,并用人IgG4標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立檢測血清IgG4水

2、平的ELISA體系;②送檢10份血清標(biāo)本至日本金沢醫(yī)科大學(xué)(應(yīng)用BindingSite試劑盒)進(jìn)行IgG4水平檢測,并將我們的結(jié)果與之比對,以檢測本體系的準(zhǔn)確性;(2)本ELISA方法的臨床應(yīng)用:①應(yīng)用此ELISA法檢測了53例正常人、103例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、41例干燥綜合征(SS)、21例多發(fā)性肌炎/皮肌炎(DM/PM)患者血清IgG4水平。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用單樣本方差分析。②對臨床中遇到的確診或高度懷疑疑似IgG4-RD患者血清

3、IgG4水平進(jìn)行了檢測,并對其臨床特點等進(jìn)行了初步探討。
　　結(jié)果:(1)我們建立的ELISA體系較穩(wěn)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線可重復(fù)性好,與日方合作組的檢測數(shù)據(jù)吻合性較好;(2)53例正常人、103例SLE、41例SS及21例DM/PM患者血清中IgG4水平分別是:0.23±0.16g/L;0.16±0.15g/L;0.22±0.18g/L;0.40±0.32g/L,且與正常人相比,SLE、SS、PM/DM患者血清IgG4水平?jīng)]有顯著性差異(

4、P>0.05)。2例臨床患者血清中IgG4水平均>1.35g/L,分別是1.63g/L、4.65g/L,在激素治療后IgG4水平明顯下降。
　　結(jié)論:該ELISA能夠準(zhǔn)確、敏感、穩(wěn)定地檢測患者血清IgG4水平,且成本低,易于操作,可向臨床推廣;多種常見自身免疫性疾病患者血清IgG4水平?jīng)]有顯著性差異,因此其敏感性和特異性較好;一定程度上,血清IgG4水平可用于IgG4-RD的診斷和療效觀察。
　　第二部分:探討SMSs在SL

5、E發(fā)病中的作用
　　目的:通過檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血單個核細(xì)胞(peripheralbloodmonouclearcells,PBMC)中鞘磷脂合成酶(sphingomyelinsynase,SMS)的表達(dá)水平,來探討其在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:收集2011-2012年于本科室就診的33例SLE患者及20例健康志愿者外周血10ml,淋巴細(xì)胞分離液提取PBMC后應(yīng)用TRIzol法提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄

6、,應(yīng)用實時熒光定量PCR(realtimePCR,RT-PCR)方法檢測二者PBMC中SMS1(sphingomyelinsynase1)和SMS2(sphingomyelinsynase2)mRNA的表達(dá)水平是否有差異。統(tǒng)計學(xué)分析采用t檢驗。
　　結(jié)果:SLE患者和健康人PBMC中代表SMS1mRNA表達(dá)水平的ΔCt1(Ct(SMS1)-Ct(GAPDH))的平均值分別是5.86±1.21、6.6±0.625;反映SMS2mRN