特異性IgM和IgG4抗體聯(lián)合檢測(cè)及基于IgY的雙抗體夾心ELISA法在日本血吸蟲(chóng)病診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：利用本實(shí)驗(yàn)室制備并純化的重組蛋白rSj14-3-3、rSjGST和可溶性蟲(chóng)卵抗原 (SEA)，建立間接ELISA方法(SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA及rSjGST-ELISA)，探討聯(lián)合檢測(cè)血清特異性IgM和IgG4對(duì)日本血吸蟲(chóng)病的診斷及療效考核的價(jià)值。利用抗可溶性蟲(chóng)卵抗原 (SEA) 卵黃抗體 (IgY)和酶標(biāo)抗SEA單克隆抗體NP28-5B組合建立雙抗體夾心ELISA方法 (S-ELISA) 用于湖沼型

2、疫區(qū)人群日本血吸蟲(chóng)病診斷的效果研究。
　　 方法：用Lowry法檢測(cè)包被物的含量，將SEA、rSj14-3-3和rSjGST以及抗可溶性蟲(chóng)卵抗原 (SEA) 卵黃抗體 (IgY) 分別包被酶標(biāo)反應(yīng)板，用棋盤滴定法確定最適抗原或抗體包被量以及血清稀釋度，分別建立三種間接ELISA 法 (SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA和rSjGST-ELISA) 以及雙抗體夾心ELISA (S-ELISA)。間接ELISA法

3、檢測(cè)急性血吸蟲(chóng)病、慢性血吸蟲(chóng)病及慢性血吸蟲(chóng)病患者治療12月、24月后血清特異性IgM和IgG4的抗體變化，并比較重組蛋白SEA包被的三種間接ELISA方法間敏感性和特異性。以改良加藤厚涂片法 (Kato-Katz法) 檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，采用S-ELISA方法檢測(cè)我省某疫區(qū)少年血清循環(huán)抗原，并同時(shí)用SEA-IHA檢測(cè)循環(huán)抗體，比較兩者敏感度和特異性。
　　 結(jié)果：SjSEA-ELISA檢測(cè)時(shí)，急性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4

4、陽(yáng)性率分別是100％、87.9％，慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是45.5％、68.2％，聯(lián)合檢測(cè)急性血吸蟲(chóng)病和慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是100％和75.8％，慢性血吸蟲(chóng)病患者治療12月、24月后特異性IgG4陽(yáng)性率分別是16％、5％；rSj14-3-3-ELISA檢測(cè)時(shí)，急性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是77.6％、60.3％，慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是

5、30.3％、48.5％，聯(lián)合檢測(cè)急性血吸蟲(chóng)病和慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是86.2％和54.5％，慢性血吸蟲(chóng)病患者治療12月、24月后特異性IgG4陽(yáng)性率分別是12％、2.5％；rSjGST-ELISA檢測(cè)時(shí)，急性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是72.4％、55.1％，慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4陽(yáng)性率分別是37.9％、50.0％，聯(lián)合檢測(cè)急性血吸蟲(chóng)病和慢性血吸蟲(chóng)病患者特異性IgM和IgG4

6、陽(yáng)性率分別是81.0％和56.1％，慢性血吸蟲(chóng)病患者治療12月、24月后特異性IgG4陽(yáng)性率分別是14％、2.5％。檢測(cè)疫區(qū)少年174例，Kato-Katz法、S-ELISA和SEA-IHA陽(yáng)性率分別是6.90％、22.41％和15.52％，經(jīng)χ2 檢驗(yàn)，p<0.01，差異有顯著性；S-ELISA和SEA-IHA敏感度和特異度比較，經(jīng)χ2 檢驗(yàn)，兩者均p>0.05，差異無(wú)顯著性；三種方法各自男生與女生檢出率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。