青春雙歧桿菌BA005抗逆性研究及其功能性應(yīng)用.pdf

1、本研究目的是從嬰兒糞便中分離出青春雙歧桿菌,經(jīng)過(guò)生化及分子鑒定后,對(duì)此分離菌株進(jìn)行抗逆環(huán)境馴化及篩選,對(duì)篩選出的優(yōu)良菌株進(jìn)行培養(yǎng)條件的優(yōu)化,從而滿足工業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)需求。為了確保其安全性,對(duì)該菌株進(jìn)行毒理試驗(yàn),同時(shí)進(jìn)行功能性測(cè)試,并開(kāi)發(fā)益生菌相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)品。
　　 分離得到的疑似目的菌株,通過(guò)特征酶及發(fā)酵糖試驗(yàn)進(jìn)行菌種屬的篩選,再進(jìn)一步應(yīng)用分子生物學(xué)方法,提取菌株16S rDNA,通過(guò)基因序列的比對(duì),對(duì)菌株進(jìn)行種的鑒定。成功分離出

2、目的菌株——青春雙歧桿菌,通過(guò)發(fā)育樹(shù)系統(tǒng)命名為:Bifidobacteriumadolescentis BA005。
　　 通過(guò)無(wú)氧-有氧交替馴化的方法,篩選出耐氧能力較強(qiáng)的青春雙歧桿菌菌株,馴化后菌株的菌落形態(tài)和顯微鏡觀察狀態(tài)基本沒(méi)有改變,菌體生長(zhǎng)速度較無(wú)氧培養(yǎng)時(shí)緩慢,生長(zhǎng)曲線中對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期拖后,但對(duì)培養(yǎng)后的活菌數(shù)影響不大,有氧培養(yǎng)24h后活菌數(shù)可達(dá)到3.30×1010cfu/mL。
　　 為降低工業(yè)生產(chǎn)中的生產(chǎn)成本,本

3、研究采用玉米汁為培養(yǎng)基質(zhì),對(duì)耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005進(jìn)行培養(yǎng)條件響應(yīng)面法優(yōu)化。確定培養(yǎng)的最佳條件:接種量5％,玉米糖化液濃度12.1Bx,初始pH值6.48,培養(yǎng)溫度37℃,發(fā)酵時(shí)間20h。在此條件下菌液最大OD值為1.819,活菌數(shù)為3.05×1012cfu/mL。
　　 人工模擬人胃、腸道酸性及酶環(huán)境,對(duì)耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005進(jìn)

4、行抗胃腸道逆環(huán)境菌株篩選,并對(duì)常用抗生素耐性進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果表明,在模擬胃液環(huán)境中菌存活率為72.12％;在模擬腸道環(huán)境中菌存活率為53.33％;對(duì)大多數(shù)常用抗生素僅為中度敏感,對(duì)氨芐西林具有較強(qiáng)的耐藥性。證明此菌株可以發(fā)揮其保健作用,維持人體健康。
　　 對(duì)Bifidobacterium adolescentis BA005進(jìn)行小鼠急性毒理試驗(yàn)及短期(30天)喂養(yǎng)試驗(yàn),試驗(yàn)劑量超過(guò)了人可能食用劑量的10倍,試驗(yàn)小鼠沒(méi)有出現(xiàn)中毒或

5、死亡等異常狀況,解剖其內(nèi)臟主要器官,亦未見(jiàn)異常。從而證明此菌為安全菌株,可以放心食用并進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。
　　 通過(guò)藥物建造腹瀉和便秘小鼠模型,對(duì)模型小鼠給予不同種類的益生菌劑,通過(guò)比較,Bifidobacterium adolescentis BA005菌株對(duì)腹瀉和便秘癥狀的緩解和治療功效最強(qiáng)。
　　 基于青春雙歧桿菌的諸多功能性,對(duì)其進(jìn)行新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)。產(chǎn)品之一為格瓦斯發(fā)酵飲料,通過(guò)雙歧桿菌和酵母菌的共同發(fā)酵,飲料中含有豐富