1-甲基乙內(nèi)酰脲及5-Fu抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　探討1-甲基乙內(nèi)酰脲單獨(dú)應(yīng)用及與5-氟尿嘧啶聯(lián)合對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　以體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組（等量PBS）、1-甲基乙內(nèi)酰脲組(M)、5-氟尿嘧啶組(Fu)、甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合組(M＋Fu)共四大組。
　　1.MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率：
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞增殖的

2、抑制作用：根據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和預(yù)實(shí)驗(yàn)，將1-甲基乙內(nèi)酰脲組設(shè)八個(gè)濃度組(M：0.5mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg·L-1、50mg·L-1、100mg·L-1、200mg·L-1、500mg·L-1）；1-甲基乙內(nèi)酰脲八個(gè)濃度組分別干預(yù)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞24、48、72小時(shí)后，MTT法檢測(cè)1-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞增殖的抑制作用。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-氟尿嘧啶分別應(yīng)用對(duì)SW480細(xì)胞增殖的抑制

3、作用：根據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和預(yù)實(shí)驗(yàn)將1-甲基乙內(nèi)酰脲、5-氟尿嘧啶分別設(shè)四個(gè)相同濃度組，以利比較抑制效果。各組分別為 M10mg·L-1、M20mg·L-1、M50mg·L-1、M100mg·L-1；Fu10mg·L-1、Fu20mg·L-1、Fu50mg·L-1、Fu100mg·L-1。上述各濃度組分別干預(yù)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，48小時(shí)后MTT法檢測(cè)各濃度組對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用。
　　③1-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用對(duì)

4、SW480細(xì)胞增殖的抑制作用：1-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用設(shè)四個(gè)組：M10mg·L-1＋Fu10mg·L-1、M20mg·L-1＋Fu20mg·L-1、M50mg·L-1＋Fu50mg·L-1、M100mg·L-1＋Fu100mg·L-1。上述各濃度組分別干預(yù)人結(jié)腸癌 SW480細(xì)胞，48小時(shí)后 MTT法檢測(cè)各組對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用，并與單獨(dú)應(yīng)用5-Fu作用進(jìn)行比較。
　　2.顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：
　　

5、為了觀察1-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用的形態(tài)學(xué)效果，應(yīng)用1-甲基乙內(nèi)酰脲和5-氟尿嘧啶分別干預(yù)SW480細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，HE染色后顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細(xì)胞形態(tài)變化。
　?、費(fèi)100 mg·L-1、Fu100 mg·L-1分別干預(yù)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞24、48、72小時(shí)后，顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細(xì)胞形態(tài)變化并攝像。
　?、贛50mg·L-1、Fu50mg·L-1分別干預(yù)結(jié)腸癌S

6、W480細(xì)胞，48小時(shí)后HE染色，顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細(xì)胞形態(tài)變化并攝像。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布：
　　為了檢測(cè)1-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布的影響，應(yīng)用1-甲基乙內(nèi)酰脲和5-氟尿嘧啶干預(yù)SW480細(xì)胞，各組分別干預(yù)SW480細(xì)胞48小時(shí)后，F(xiàn)CM檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期分布。
　　①1-甲基乙內(nèi)酰脲二個(gè)濃度組：M20mg·L-1、M50mg·L-1；
　?、?

7、-氟尿嘧啶一個(gè)濃度組：Fu20mg·L-1；
　　③1-甲基乙內(nèi)酰脲與5-氟尿嘧啶聯(lián)合二個(gè)濃度組：M20mg·L-1＋Fu20mg·L-1、M50mg·L-1＋Fu20mg·L-1；
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1. MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示：
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲在5～500 mg·L-1濃度范圍能抑制SW480細(xì)胞增殖，增殖抑制率呈濃度遞增趨勢(shì)。各組間兩兩比較差異有顯著性(P＜0.05)。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲

8、單獨(dú)應(yīng)用時(shí)，作用于結(jié)腸癌 SW480細(xì)胞48小時(shí)后，對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)。
　?、?0、20mg·L-11-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞的抑制作用與等濃度的5-Fu作用相比，差異無顯著性(P＞0.05)；50、100mg·L-11-甲基乙內(nèi)酰脲對(duì)SW480細(xì)胞的抑制作用不及等濃度5-Fu，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　④1-甲基乙內(nèi)酰脲和5-FU聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作強(qiáng)于單獨(dú)應(yīng)用相等濃度的1-甲基乙

9、內(nèi)酰脲、5-Fu，差異有顯著性(P＜0.05)。
　?、軲10mg·L-1＋Fu10mg·L-1對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用與5-Fu20mg·L-1單獨(dú)應(yīng)用效果相當(dāng)，差異無顯著性(P＞0.05)；M50mg·L-1＋Fu50mg·L-1對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用強(qiáng)于5-Fu100 mg·L-1(P＜0.05)。
　　2.顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)改變:
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu連續(xù)處理的SW480細(xì)胞在顯

10、微鏡下觀察均顯示細(xì)胞體積變小，細(xì)胞形態(tài)變圓，細(xì)胞異形性減少，細(xì)胞核體積變小，核仁數(shù)目減少，染色變淡，細(xì)胞間連接變疏松，部分細(xì)胞不再貼壁。
　?、?-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu連續(xù)處理的SW480細(xì)胞HE染色后顯微鏡下觀察均顯示細(xì)胞變圓且分散，細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞漿濃縮，核染色變淡，核仁數(shù)減少；部分細(xì)胞核膜消失、細(xì)胞溶解碎裂。
　　3.FCM結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，1-甲基乙內(nèi)酰脲、5-Fu各處理組 SW480細(xì)胞凋亡率增加，細(xì)胞周

11、期分布中S期細(xì)胞分布增多，差異具有顯著性(P＜0.05)。與Fu20mg·L-1組相比,聯(lián)合應(yīng)用組處理的SW480細(xì)胞凋亡率增加，細(xì)胞周期分布中S期細(xì)胞分布增多，差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.1-甲基乙內(nèi)酰脲在體外對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞有抑制增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
　　2.低濃度時(shí)，1-甲基乙內(nèi)酰脲抑制人結(jié)腸癌 SW480細(xì)胞增殖的效果與5-Fu相當(dāng)；高濃度時(shí)，1-甲基乙內(nèi)酰脲抑制人結(jié)腸癌