轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14對結(jié)腸癌SW480細胞Wnt-β-catenin信號的影響.pdf

1、目的:
　　研究轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14對結(jié)腸癌SW480細胞Wnt/β-catenin信號的影響，初步探討其作用機制。
　　方法:
　　1.在HEK293T細胞中瞬時轉(zhuǎn)染構(gòu)建的ZBTB14質(zhì)粒，利用響應Wnt信號的TopFlash熒光素酶報告顯示系統(tǒng)檢測ZBTB14蛋白對內(nèi)源Wnt/β-catenin信號的影響，同時檢測ZBTB14蛋白對Wnt3a、Dvl、LRP、β-catenin和β-catenin-lef1激活Wn

2、t/β-catenin信號能力的影響。
　　2.利用Western blot實驗檢測ZBTB14蛋白對HEK293T和SW480細胞內(nèi)源β-catenin及非磷酸化β-catenin蛋白量的影響。
　　3.利用免疫熒光實驗檢測ZBTB14蛋白對SW480細胞內(nèi)源β-catenin及非磷酸化β-catenin蛋白含量、細胞內(nèi)定位的影響。
　　4.應用RT-PCR技術(shù)檢測ZBTB14蛋白對HEK293T和SW480細胞內(nèi)β

3、-catenin和Wnt/β-catenin信號下游靶基因Cyclin D1和TIAM1 mRNA水平的影響。
　　結(jié)果:
　　1.轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14是一種定位在細胞核的蛋白，可以抑制Wnt3a、Dvl、LRP、β-catenin對Wnt/β-catenin信號激活，但不能抑制由β-catenin-lef1融合蛋白激活的Wnt/β-catenin信號。
　　2.轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14可以明顯降低HEK293T和SW48

4、0細胞的內(nèi)源β-catenin蛋白含量，特別是具有轉(zhuǎn)錄活性的非磷酸化β-catenin蛋白含量，這可能是通過降低HEK293T和SW480細胞內(nèi)β-catenin mRNA水平來影響了β-catenin蛋白的合成速度。
　　3.轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14抑制Wnt/β-catenin信號下游基因Cyclin D1和TIAM1的表達。
　　結(jié)論:
　　轉(zhuǎn)錄因子ZBTB14通過降低結(jié)腸癌SW480細胞β-catenin蛋白mRN