腫瘤壞死因子信號傳導(dǎo)及其旁路在小鼠肝癌細(xì)胞凋亡過程中作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤壞死因子信號傳導(dǎo)及其旁路在小鼠肝癌細(xì)胞凋亡過程中作用及其機(jī)制的研究姓名：侍作亮申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：陳孝平20060401華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2006凋亡的。1985年克隆了TNF并于大腸桿菌中表達(dá)為詳細(xì)的研究腫瘤壞死因子對腫瘤細(xì)胞的作用和生物學(xué)特性提供方便。隨后一年科研機(jī)構(gòu)和藥學(xué)企業(yè)進(jìn)行了大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證明了TNF對各種各樣癌癥的有效性，對小鼠模型和人體腫瘤異

2、種移植的裸鼠進(jìn)行瘤內(nèi)應(yīng)用TNF有效地使腫瘤消退。然而，僅當(dāng)全身給藥才能夠殺死轉(zhuǎn)移到機(jī)體遠(yuǎn)處區(qū)域的腫瘤細(xì)胞或有助于根除亞臨床轉(zhuǎn)移灶。不辛的是，全身性給藥在小鼠鮮有效果，這可能由于腫瘤多樣性所造成。盡管在過去幾年，已詳細(xì)描述了細(xì)胞死亡的信號傳導(dǎo)通路，但某些腫瘤細(xì)胞為什么能夠抵抗TNF的細(xì)胞毒性作用仍不清楚。細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)過程是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)級聯(lián)，TNF既能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，又能激活抗細(xì)胞凋亡的轉(zhuǎn)錄因子NF—KB。此外，TNF是否還通過其信號傳導(dǎo)

3、的網(wǎng)絡(luò)結(jié)點(diǎn)TRAF2，RIP等激活細(xì)胞內(nèi)其它細(xì)胞因子(如PKC，AKT等)，這些細(xì)胞因子是如何影響TNF細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)過程都有待進(jìn)一步的研究，探討TNF作用于細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的分子機(jī)制以及細(xì)胞的生命狀態(tài)可以為TNF的臨床研究和應(yīng)用提供分子理論基礎(chǔ)。研究證實(shí)，TNF—n通過其信號傳導(dǎo)的網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)TRAF2激活JNK激酶和P38，然而，JNK和P38在TNF—a信號傳導(dǎo)過程中的作用目前尚存爭議。我們通過不同濃度TNF—a作用于H22細(xì)胞后

4、，于不同時(shí)間以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，以westernblot檢測JNK，P38和caspase一8的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率的高低與JNK，P38及caspase一8表達(dá)及活性水平一致，當(dāng)以sp600125抑制JNK活性或SB203580抑制P38活性，細(xì)胞凋亡率顯著下降，其下降水平與caspase一8表達(dá)下調(diào)水平一致。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，JNK和P38信號傳導(dǎo)通路在TNFa信號傳導(dǎo)過程中呈現(xiàn)出顯著的促調(diào)亡作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)P38表達(dá)水平與活性對J

5、NK表達(dá)及活化呈正性調(diào)節(jié)作用。盡管JNK和P38在TNF一Ⅱ信號傳導(dǎo)通路中顯著上調(diào)并呈現(xiàn)出促凋亡作用，但H22細(xì)胞對TNF—Q細(xì)胞毒性并不敏感，TNFQ濃度達(dá)到60ng／m1作用于H22細(xì)胞8h，細(xì)胞凋亡率與對照組比較才有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這個(gè)濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過人體耐受的極限濃度，那么為何H22細(xì)胞對TNFa不敏感文獻(xiàn)資料顯示，TNF—a不僅通過NF—KB拮抗細(xì)胞凋亡，而且通過復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)，參與調(diào)節(jié)PKC—a的表達(dá)及其活性，而PKC—n具有