凝結(jié)芽孢桿菌的分離鑒定及其對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能和肉品質(zhì)的影響.pdf

1、養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的大量使用，導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性、動(dòng)物產(chǎn)品中藥物殘留，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。本試驗(yàn)旨在從健康肉鴨腸道中分離出一株凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans），研究其生物學(xué)特性，優(yōu)化其發(fā)酵工藝，制備成微生態(tài)制劑，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能和肉品質(zhì)的影響。本研究具體內(nèi)容如下：
　　1、鴨源凝結(jié)芽孢桿菌的分離與鑒定
　　從肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)采集50份鴨腸道黏液樣品，利用分離培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離和純化，結(jié)合菌落形態(tài)、顯

2、微形態(tài)、生理生化試驗(yàn)、16S rDNA序列測(cè)定和同源性分析鑒定其種屬。結(jié)果表明：分離得到1株革蘭陽(yáng)性菌B.C07，菌體呈桿狀，兩端鈍圓，芽孢端生，生理生化鑒定符合凝結(jié)芽孢桿菌基本特征，經(jīng)16S rDNA序列鑒定和同源性分析后確定該菌株為凝結(jié)芽孢桿菌。
　　2、菌株B.C07的生物學(xué)特性分析
　　測(cè)定了凝結(jié)芽孢桿菌B.C07的生長(zhǎng)曲線和pH曲線，隨著菌體濃度的增加，菌液pH在不斷降低，在18 h時(shí)菌體濃度達(dá)到最大。菌株B.C0

3、7能抑制大腸桿菌、傷寒沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌和多殺性巴氏桿菌的生長(zhǎng)；耐酸、耐熱、耐膽鹽的能力也較強(qiáng)；對(duì)常見(jiàn)的13種抗生素敏感；具有蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶活性。3、凝結(jié)芽孢桿菌B.C07發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化
　　利用響應(yīng)面法來(lái)優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方。首先確定最佳碳源和氮源，結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，選擇淀粉和玉米面作為碳源，大豆粉作為有機(jī)氮源，硫酸銨作為無(wú)機(jī)氮源代替基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳氮源。通過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出影響

4、菌體濃度的顯著因素：淀粉、大豆粉和碳酸氫鈉。然后進(jìn)行最陡爬坡試驗(yàn)，得出淀粉、大豆粉和碳酸氫鈉的中心點(diǎn)分別為13 g/L、13 g/L、2.5 g/L。通過(guò)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，得出結(jié)果后進(jìn)行方差分析，等高線圖和響應(yīng)面圖分析，最終得出最佳培養(yǎng)基配方為淀粉27.29 g/L、大豆粉23.13 g/L、碳酸氫鈉2.99g/L、玉米面5.65 g/L、(NH4)2SO41.07 g/L、NaCl2.91 g/L、K2HPO42.09

5、g/L、MgSO40.08 g/L、MnSO40.01 g/L，在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件下，理論菌落數(shù)為2.01×109cfu/mL。然后對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行逐一優(yōu)化，得出最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件為：初始pH=7.0，培養(yǎng)溫度40℃，轉(zhuǎn)速210 r/min，三角瓶裝液量30 mL/250 mL，接種量6％。利用最佳培養(yǎng)基配方和最佳培養(yǎng)條件培養(yǎng)48h后，活菌總數(shù)為2.51×109cfu/mL，芽孢數(shù)為2.42×109cfu/ mL，芽孢率為96.4%。
　

6、　4、凝結(jié)芽孢桿菌B.C07對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能和肉品質(zhì)的影響
　　隨機(jī)挑選360只1日齡櫻桃谷肉鴨，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只。其中A組為空白對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；B組、C組和D組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)日糧中添加的凝結(jié)芽孢桿菌制劑含量分別為106 cfu/kg、107 cfu/kg、108 cfu/kg。42日齡時(shí)，得出各組1-21日齡和1-42日齡肉鴨的生長(zhǎng)性能，包括總增重、平均日增重、總采食量、平均日采食量和料重比。屠宰

7、后測(cè)定肉品質(zhì)包括胸肌和腿肌的pH、滴水損失率、蒸煮損失率、水分含量、粗蛋白含量和粗脂肪含量。結(jié)果表明：在基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的凝結(jié)芽孢桿菌制劑，能顯著提高櫻桃谷肉鴨的平均日增重（P＜0.05）和飼料利用率（P＜0.05），顯著降低料重比（P＜0.05），達(dá)到改善肉鴨生長(zhǎng)性能的作用；還能顯著降低胸肌和腿肌的滴水損失率（P＜0.05）、蒸煮損失率（P＜0.05）和水分含量（P＜0.05），顯著提高胸肌和腿肌中粗蛋白和粗脂肪的含量（P＜0.