體外培養(yǎng)中CSA對(duì)缺氧復(fù)氧所致MSCs凋亡的影響和機(jī)制初探.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是組織工程研究中普遍采用的種子細(xì)胞.于1867年德國(guó)病理學(xué)家Cohnheim首次提出骨髓中存在MSCs,隨研究進(jìn)一步深入,人們發(fā)現(xiàn)這種細(xì)胞能分化為多種間充質(zhì)細(xì)胞并形成骨、軟骨、肌腱、脂肪等組織,甚至可被誘導(dǎo)形成心肌細(xì)胞,加之其易于獲取、具有免疫耐受性、能長(zhǎng)期存活、易于轉(zhuǎn)染并能長(zhǎng)期表達(dá)外源基因等特點(diǎn),干細(xì)胞應(yīng)用研究日益引起科學(xué)家們的關(guān)注.目前MSCs在臨床上已開(kāi)始實(shí)驗(yàn)性用于心臟修復(fù),但由于局部微環(huán)境促凋亡因素的

2、存在使其在移植后不可避免出現(xiàn)凋亡.而已有許多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)環(huán)胞霉素A (CSA)可以減少多個(gè)細(xì)胞系發(fā)生的凋亡,CSA對(duì)MSCs是否也具有相近的作用目前尚不得而知.本實(shí)驗(yàn)采取不同濃度CSA處理大鼠MSCs后,在體外環(huán)境中給予缺氧再?gòu)?fù)氧后應(yīng)用多個(gè)方法檢測(cè)其凋亡的情況并初步測(cè)定部分有關(guān)的凋亡通路上關(guān)鍵因子初步解釋其可能的抗凋亡機(jī)制. 方法：采用密度梯度離心法分離獲取SD大鼠的MSCs,再以貼壁篩選法純化MSCs.取傳代后第三代

3、細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)鑒定,進(jìn)入實(shí)驗(yàn).先采取不同濃度(0.5.5μmol/L)CSA對(duì)MSCs進(jìn)行預(yù)處理,實(shí)驗(yàn)組根據(jù)CSA濃度分為(0 uM CSA組,0.5 uMCSA組,1uM CSA組,2.5uM CSA組,5uM CSA組)以及常規(guī)培養(yǎng)組.然后實(shí)驗(yàn)組在體外環(huán)境中給予缺氧再?gòu)?fù)氧(H/R)后和常規(guī)培養(yǎng)組應(yīng)用多個(gè)方法檢測(cè)其凋亡的情況,并檢測(cè)細(xì)胞色素C的釋放和caspase-3的活性,線粒體膜電位(△ψm)的變化. 結(jié)果：在缺氧復(fù)氧