腺苷A2A受體阻斷劑SCH58261對(duì)大鼠杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分
　　第一部分
　　腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對(duì)大鼠杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型的影響
　　目的:目前臨床上仍有20％-30％的癲癇患者藥物治療效果較差,不能很好的控制癲癇發(fā)作,這部分患者的發(fā)作類型主要是顳葉癲癇,因此仍需研究新的抗癲癇藥物。杏仁核電點(diǎn)燃模型是模擬人類顳葉癲癇最好的癲癇模型,且對(duì)現(xiàn)有的大部分抗癲癇藥物耐藥。因此應(yīng)用點(diǎn)燃模型在動(dòng)物體內(nèi)研究藥物是否具有抗癲癇作用可以為以后的臨床藥物治療

2、提供理論基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn),腺苷 A2A受體阻斷劑在很多慢性疾病模型中如帕金森病模型可以長(zhǎng)時(shí)間發(fā)揮作用,但是它在不同的癲癇模型中的作用存在爭(zhēng)議,在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)研究腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對(duì)大鼠杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型的作用及對(duì)點(diǎn)燃進(jìn)程的影響。
　　方法:將電極植入 Wistar大鼠右側(cè)杏仁核,每天給予500μA的電流刺激,大鼠連續(xù)十天在刺激后達(dá)到5級(jí)發(fā)作視為點(diǎn)燃成功。點(diǎn)燃成功后的大鼠,通過腹腔給藥的方法,觀察 SC

3、H58261對(duì)模型成功后各發(fā)作參數(shù)的作用。除此之外,觀察藥物對(duì)杏仁核點(diǎn)燃進(jìn)程的影響,每天刺激前30min給予 SCH58261,記錄大鼠每天發(fā)作級(jí)數(shù)及腦電變化。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,嚴(yán)密觀察藥物對(duì)大鼠行為學(xué)的影響。
　　結(jié)果:在成功點(diǎn)燃的癲癇模型中,SCH58261(0.005,0.05,0.5mg/kg)對(duì)全面性發(fā)作閾值(GST)沒有影響。以 GST(+4μA)為刺激強(qiáng)度,SCH58261(0.005,0.05mg/kg)可以降低杏仁

4、核后放電時(shí)間(ADD),運(yùn)動(dòng)性發(fā)作持續(xù)時(shí)間(MSD),5級(jí)發(fā)作持續(xù)時(shí)間(S5D)和癲癇發(fā)作總的持續(xù)時(shí)間(SD);SCH58261(0.005,0.05mg/kg)對(duì)癲癇4級(jí)發(fā)作潛伏期(S4L)和癲癇發(fā)作狀態(tài)(SS)沒有影響;SCH58261(0.5mg/kg)對(duì)點(diǎn)燃模型各發(fā)作參數(shù)均無抑制作用。以2×GST為刺激強(qiáng)度,SCH58261(0.05mg/kg)對(duì)ADD和S5D均無明顯抑制作用,但可以降低 MSD和SD發(fā)作時(shí)間。SCH58261

5、(0.005,0.05,0.5mg/kg)不影響杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型進(jìn)程。
　　結(jié)論:SCH58261在0.005-0.05mg/kg范圍內(nèi)不能影響杏仁核癲癇模型點(diǎn)燃進(jìn)程,但可以抑制模型點(diǎn)燃成功后癇性發(fā)作。
　　第二部分
　　腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對(duì)大鼠杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型海馬損傷的作用及機(jī)制研究
　　目的:臨床很多顳葉癲癇患者及顳葉癲癇動(dòng)物模型中都發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元缺失,并與癲癇反復(fù)發(fā)作有相關(guān)性。減輕

6、海馬神經(jīng)元損傷對(duì)治療癲癇有一定作用。MAPK信號(hào)通路與癲癇的關(guān)系密切,并且參與細(xì)胞生長(zhǎng)分化的很多過程,同時(shí)它也是腺苷 A2A受體的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。本部分實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上,研究杏仁核點(diǎn)燃癲癇模型海馬損傷情況及腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對(duì)其保護(hù)作用以及與 MAPKs的關(guān)系。
　　方法:將電極植入 Wistar大鼠右側(cè)杏仁核,每天給予500μA的電流刺激,大鼠連續(xù)10天在刺激后達(dá)到5級(jí)發(fā)作視為點(diǎn)燃成功。SCH58261

7、干預(yù)的大鼠,在每天刺激前30分鐘腹腔注射0.05mg/kg藥物。成功點(diǎn)燃的大鼠,在最后一次5級(jí)發(fā)作后2小時(shí)處死,尼氏染色法觀察各組海馬神經(jīng)元損傷情況,Western blot檢測(cè)海馬 JNK、p-JNK、p38、p-p38、ERK、p-ERK的表達(dá),免疫組化法觀察 p-JNK、p-p38的表達(dá)部位。
　　結(jié)果:尼氏染色結(jié)果顯示杏仁核點(diǎn)燃大鼠刺激側(cè)海馬 CA3區(qū)有神經(jīng)元損傷,腹腔注射 SCH58261對(duì)神經(jīng)元損傷有保護(hù)作用。假手術(shù)組

8、、點(diǎn)燃模型組及SCH58261組海馬CA3區(qū)正常形態(tài)神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別為36.0±2.6,,22.2±1.9,31.2±1.9;各組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot及免疫組化方法顯示刺激側(cè)海馬 CA3區(qū) p-JNK、p-p38表達(dá)明顯增多,SCH58261對(duì)其有抑制作用;杏仁核點(diǎn)燃不影響 p-ERK的表達(dá)。
　　結(jié)論:腹腔注射 SCH58261可以減輕杏仁核點(diǎn)燃模型海馬 CA3區(qū)神經(jīng)元的損傷,其機(jī)制可能是通過抑制JNK、p