HCV感染性克隆體內(nèi)轉(zhuǎn)染樹鼩的初步研究.pdf

1、目的：樹鼩是一種高等級(jí)的野生小動(dòng)物，對(duì)許多人類病毒易感。近年來的研究顯示，樹鼩肝細(xì)胞在體外可支持乙、丙型肝炎病毒復(fù)制，是一種潛在的乙、丙型肝炎病毒易感的小動(dòng)物模型。本研究采用體外合成的全長(zhǎng)HCV感染性克隆轉(zhuǎn)染樹鼩，觀察HCV感染性克隆體內(nèi)轉(zhuǎn)染樹鼩后病毒轉(zhuǎn)歸情況，探討HCV感染樹鼩動(dòng)物模型的可能性。 方法：選擇人工飼養(yǎng)的成年樹鼩8只，分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組4只。實(shí)驗(yàn)組采用50微克全長(zhǎng)HCVRNA通過股靜脈接種，對(duì)照組樹鼩注射無關(guān)

2、質(zhì)粒DNA。然后于接種后第5小時(shí)，第1、3、5、7、10、14、21、28天通過股靜脈采血約0.5毫升，分離血清后置-80℃保存；第5天活體取樹鼩肝臟組織，第28天采血后處死，取肝組織用福爾馬林固定。分別檢測(cè)以下指標(biāo)： 1)通過熒光定量RT-PCR的方法檢測(cè)樹鼩血清HCVRNA水平； 2)通過ELISA的方法觀察血清抗-HCV抗體的變化； 3)通過肝組織的免疫組織化學(xué)檢測(cè)HCV抗原的表達(dá)； 4)通過肝組織

3、的原位雜交方法檢測(cè)HCVRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1)實(shí)驗(yàn)組Q14號(hào)樹鼩在接種感染性HCVRNA后第1天血清HCV水平為90Copies/ml，第3天略微上升到1.01×102Copies/ml。Q3號(hào)樹鼩于接種后第3天血清HCV水平檢測(cè)為3.09×102Copies/ml，其余時(shí)間點(diǎn)血清HCV定量均為陰性。另外兩只實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物A1和A32的血清檢測(cè)HCV水平始終為陰性； 2)在4只實(shí)驗(yàn)組樹鼩中，Q3和A1號(hào)樹鼩分別于21天和

4、28天在血清中檢出抗-HCV抗體陽性； 3)在4只實(shí)驗(yàn)組樹鼩中，Q3號(hào)樹鼩于第5天在肝組織中檢出HCV抗原表達(dá)； 4)在4只實(shí)驗(yàn)組樹鼩中，Q3號(hào)樹鼩于第5天在肝組織中檢出HCVRNA表達(dá)； 5)如以血清中HCVRNA和/或抗HCV陽性為感染標(biāo)志，則4只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中有3只被感染。 結(jié)論：HCV感染性克隆可以一過性感染樹鼩，導(dǎo)致樹鼩出現(xiàn)短暫的病毒血癥和HCV抗原表達(dá)，但是該病毒血癥的HCV水平較低，很快就下降到