血小板單克隆抗體和殼聚糖復(fù)合涂層血管內(nèi)支架的制備與研究.pdf

1、冠心病是嚴(yán)重威脅人類生命健康的重大疾病,冠心病的治療可分為藥物治療、外科手術(shù)治療和介入治療三大類。冠心病介入治療由于不需要全麻和開胸,手術(shù)創(chuàng)傷小,患者痛苦少,恢復(fù)快,并且在急性冠脈綜合征等緊急情況下也可迅速實(shí)現(xiàn)血運(yùn)重建,因而成為冠心病治療的重要手段。目前在接受介入治療的患者中,約95％以上的病變需要置入支架,支架置入術(shù)已成為介入治療的核心技術(shù)。盡管如此,支架內(nèi)再狹窄仍是支架置入術(shù)后最常見的并發(fā)癥,大約20～30％的病人出現(xiàn)支架內(nèi)再狹窄,

2、需要重復(fù)的介入治療。藥物支架作為新一代血管內(nèi)支架產(chǎn)品對(duì)于支架內(nèi)再狹窄起到了有效的抑制作用,但是隨著臨床評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)的不斷積累,人們發(fā)現(xiàn)藥物支架在抑制支架內(nèi)再狹窄的同時(shí),對(duì)于支架血栓癥,特別是后期和遠(yuǎn)期血栓的療效并不理想。因此,開發(fā)新一代支架必須在實(shí)現(xiàn)其抑制再狹窄效果的同時(shí),達(dá)到抑制或減輕支架血栓癥的療效。
　　 血管內(nèi)支架涂層策略是血管內(nèi)涂層支架研發(fā)過程中的核心技術(shù),不同的涂層策略及其組合可以開發(fā)具備特定作用的血管支架,而且涂層技術(shù)

3、的不斷更新也帶來新型支架的出現(xiàn),是支架研究中的熱點(diǎn)之一。目前不同種類涂層支架目的都在提高支架的血液相容性和組織相容性,使支架起到抑制支架內(nèi)再狹窄和促進(jìn)內(nèi)皮修復(fù)的作用。本研究基于血小板膜GPⅡb/Ⅲa受體拮抗劑能夠強(qiáng)效抑制血小板膜GPⅡb/Ⅲa活化而導(dǎo)致血小板聚集這一最終共同途徑,以及其具有潛在的抗血管平滑肌增生和抗炎癥反應(yīng)的能力的理論基礎(chǔ),選擇聚酯類材料為涂層基質(zhì),國(guó)產(chǎn)SZ-21單鏈抗體作為有效藥物,利用超聲霧化噴涂和聚電解質(zhì)層層組裝技

4、術(shù)相結(jié)合的方法,在對(duì)聚合物基質(zhì)改性的基礎(chǔ)上,構(gòu)建含有抗血小板藥物和殼聚糖的多層復(fù)合體系,制備利于抑制血栓形成和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞粘附的支架表面生物活性涂層,論文的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 ①裸支架經(jīng)過酸洗預(yù)處理后,不銹鋼表面雜質(zhì)和氧化層得到有效去除,酸洗后的支架表面元素組成與標(biāo)準(zhǔn)316L不銹鋼一致,同時(shí)酸洗后支架表面粗糙度增加,與聚乳酸溶劑的接觸角隨酸洗時(shí)間增加逐漸減少,粗糙度的增加和接觸角的減少有利于增加聚乳酸溶液和支架表面的親和

5、力,利于后續(xù)聚乳酸基質(zhì)涂層的制備;
　　 ②采用自行設(shè)計(jì)的微噴涂裝置和制備工藝能夠制備出符合質(zhì)量要求的聚乳酸基質(zhì)涂層,利用金相顯微鏡焦平面測(cè)量法能夠測(cè)量聚乳酸涂層的厚度,設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)篩選最佳的噴涂條件為聚合物的濃度5mg/ml,裝置的載氣壓力5psi,裝置的噴涂時(shí)間810s,涂層的表面元素分析證明了涂層的完整覆蓋,涂層的粗糙度分析證明了涂層的分布均勻性,涂層結(jié)合力分析證明支架擴(kuò)張過程中涂層可以保持完整,不會(huì)發(fā)生破壞,涂層降解失重

6、率分析表明涂層的降解受到涂層厚度和噴涂方法的影響,降解時(shí)間隨著涂層厚度的增加而延長(zhǎng),噴涂法制備涂層的降解時(shí)間要短于浸涂法。
　　 ③在明確溶劑pH值的變化不影響單抗生物學(xué)活性的前提下,在聚乳酸膜表面進(jìn)行復(fù)合涂層的組裝,掃描電鏡結(jié)果表明經(jīng)過層層組裝后,膜表面因氨解反應(yīng)出現(xiàn)的褶皺現(xiàn)象得到改善,組裝過程中表面接觸角發(fā)生交替變化,不同熒光光譜分析的結(jié)果表明復(fù)合涂層的兩種成份均隨組裝層數(shù)的增加而增加,趨勢(shì)基本呈線性關(guān)系,激光共聚焦顯微鏡觀

7、察結(jié)果表明復(fù)合涂層存在層間局部穿插現(xiàn)象;
　　 ④正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得出聚乳酸基質(zhì)涂層支架表面氨解的最佳條件為即己二胺濃度0.5mol/L,噴涂次數(shù)30次,氨解時(shí)間30s,氨解溫度50℃,支架氨解后的氨基密度數(shù)量級(jí)約為10-9mol/mm2,復(fù)合涂層組裝后表面凹凸不平現(xiàn)象得到改善,但均勻度不如基質(zhì)涂層,熒光標(biāo)記分析結(jié)果表明組裝成份能夠在支架表面均勻分布,放射性標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果表明抗體量隨著組裝層數(shù)的增加基本成線性增加的趨勢(shì),抗體的釋放時(shí)間

8、和速度得到提高,突釋效應(yīng)有所緩解;
　　 ⑤體外生物相容性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)合涂層溶血率低于5％的溶血實(shí)驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn),能使正常血漿的APTT、PT延長(zhǎng),無明顯血小板激活現(xiàn)象,具有較好的血液相容性,復(fù)合涂層允許Eahy926內(nèi)皮細(xì)胞粘附、遷移和增殖,且遷移率和增殖率均與復(fù)合涂層的組裝層數(shù)具有相關(guān)性;
　　 ⑥將復(fù)合涂層支架和316L不銹鋼裸支架分別置入兔腹主動(dòng)脈,在1、4、12周后,對(duì)置入支架段血管、主要臟器組織和血清運(yùn)用組織切