凝血因子Ⅷ室間調(diào)查品的研制.pdf

1、目的：
　　為了評價各醫(yī)院實驗室對于凝血因子Ⅷ（簡寫：FⅧ）項目的檢測能力，以及實驗室間質(zhì)量評估的需要，我們研制了多種濃度水平的FⅧ室間調(diào)查品。
　　方法：
　　1.FⅧ調(diào)查品的制備：選用不同來源、FⅧ含量各異的新鮮冰凍血漿，或者采用化學(xué)吸附法，調(diào)整血漿中FⅧ的濃度。用正交試驗確定加入凍干保護(hù)劑的最佳比例，并依據(jù)凍干分析軟件監(jiān)控并優(yōu)化凍干工藝，制備多種濃度的FⅧ室間調(diào)查品。
　　2． FⅧ調(diào)查品的評價：
　

2、?。?）參照《中國生物制品檢定規(guī)程》中的相關(guān)要求，對自制調(diào)查品的外觀性狀、分裝精度、含水量、復(fù)溶性、同質(zhì)性和適用性等性能指標(biāo)進(jìn)行評價。
　?。?）參照中國合格評定國家認(rèn)可委員會《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》（CNAS-GL03）對自制調(diào)查品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評價。
　?。?）依據(jù)臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）EP25《evaluation of stability of In Vitro Diagnostic R

3、eagents》中的加速試驗方法預(yù)估自制調(diào)查品的有效期。
　　3. FⅧ調(diào)查品的應(yīng)用：采用自制調(diào)查品進(jìn)行3次室間調(diào)查，評價自制調(diào)查品的實際應(yīng)用性以及各實驗室FⅧ項目的檢測能力。由于中國絕大多數(shù)的凝血因子檢測實驗室采用凝固法測定其活性，以％（活性）表示凝血因子所含的量（1%大致相當(dāng)于0.01個國際單位IU/mL），因此文中凝血因子的含量（即凝血因子的濃度）以%表示。
　　結(jié)果：
　　1.制備：
　?。?）經(jīng)濃度調(diào)整

4、可以得到FⅧ范圍在5%至110%的備用血漿。
　?。?）根據(jù)正交試驗得到凍干保護(hù)劑的最佳配比：海藻糖（1.5% w/v）甘氨酸（0.5%w/v）4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）（0.2% w/v）。
　?。?）凍干工藝優(yōu)化流程為：1小時內(nèi)將樣本溫度降至-40℃；預(yù)凍5小時后啟動主干燥（真空度為0.4mPa）；隔板升溫至-20℃；解析干燥（真空度為極限真空）隔板升至0℃；總干燥過程為48小時。
　　2.評價：
　

5、　（1）自制調(diào)查品的無菌實驗，外觀性狀、復(fù)溶性、同質(zhì)性、適用性、分裝精度（最佳CV%為0.57）和含水量（1.29%至2.87%）均符合《中國生物制品檢定規(guī)程》的要求。
　?。?）均勻性評價：采用單因素方差分析比較自制調(diào)查品瓶內(nèi)和瓶間的差異，各批調(diào)查品的實際統(tǒng)計量F值為0.064至2.13，均小于界值3.02（F（9,10）），說明在α=0.05水平時，自制調(diào)查品中的FⅧ含量均勻。穩(wěn)定性評價：采用兩組獨立樣本的t檢驗比較自制調(diào)查品

6、間隔30天的FⅧ濃度的差異，統(tǒng)計量p值為0.053至0.87，p值均>0.05，說明在α=0.05，t0.05(10)=2.228，間隔30天自制調(diào)查品無顯著差異，自制調(diào)查品中FⅧ的含量穩(wěn)定。
　　（3）有效期預(yù)估：抽取兩批調(diào)查品（FⅧ濃度接近商品化質(zhì)控品），用加速試驗Arrhenius方程式進(jìn)行有效期推斷，自制調(diào)查品在4℃的的有效期分別為197天和106天。
　　3.應(yīng)用：采用WHO凝血因子室間質(zhì)評統(tǒng)計方式，以等級制評價各

7、實驗室的檢測結(jié)果（分ABCDE五個等級，A級最優(yōu)）。第一、二次室間調(diào)查的范圍是上海市6家開展凝血因子項目檢測的實驗室，所發(fā)放的自制FⅧ調(diào)查品濃度水平分別為7.1%、50.3%和78.5%；103.6%、48.9%和36.0%。并同時發(fā)放商品化質(zhì)控品對實驗室的檢測能力進(jìn)行評價，兩者評價結(jié)果一致，兩次調(diào)查均有一家實驗室超出A級。參加第三次調(diào)查的實驗室為18家，涵蓋中國14個省市。發(fā)放5個批號樣本，每批調(diào)查品FⅧ（%）的中位數(shù)分別為42.2、