臨床標(biāo)本中是否存在沙眼衣原體噬菌體的探索.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文臨床標(biāo)本中是否存在沙眼衣原體噬菌體的探索姓名：李玲杰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)；皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：劉全忠2012-05天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文培養(yǎng)( 單獨M c C o y 培養(yǎng)及與E 型標(biāo)準(zhǔn)株的混合培養(yǎng)) ，再用已制備的衣原體噬菌體p h i C P G l 衣殼蛋f 蘭t V P l 單抗通過免疫熒光檢測標(biāo)本中衣原體噬菌體V p l 蛋白的存在。以純化過的衣原體噬菌體p h i C P G l 衣

2、殼蛋白V p l 為抗原，通過E L I S A 法和W e s t e r n 印跡法檢測臨床血清標(biāo)本中V P l 抗體的存在。結(jié)果：共收集臨床分泌物標(biāo)本1 5 4 2 例，其中C ．T ( + ) 患者8 5 9 例， C ．T( ．) 患者6 8 3 例；3 6 例成功擴(kuò)增出衣原體噬菌體衣殼蛋白V p l 基因，其中C ．T( + ) 標(biāo)本2 8 例，C ．T ( ．) 標(biāo)本8 例。測序結(jié)果顯示：擴(kuò)增所得的V p l 基因序列與最

3、終設(shè)計的引物目標(biāo)片段僅4 或5 個堿基位點的差異，以N C B Ib l a s t 網(wǎng)上檢索與衣原體噬菌體p h i C P G l ，c h p 4 ，p h iC P A R 3 9 ，c h p 3 ，c h p 2 ，序列的覆蓋率和相似度均在9 0 ％以上。免疫熒光法檢測了3 6 份V p lg e n e 初篩陽性的分泌物標(biāo)本，未發(fā)現(xiàn)其中有衣原體噬菌體V p l 蛋白的存在。用V p l 蛋白作為抗原通過間接E L I S

4、A 法共篩查4 5 9 例患者的血清，其中2 6 7例C ．T ( + ) 患者的血清， 1 7 例檢出V p l 蛋白抗體。測定1 8 6 例正常人血清，6例檢出V p l 蛋白抗體。應(yīng)用W e s t e m 印跡法對上述2 3 例E L I S A 陽性血清進(jìn)行V p l 蛋白抗體鑒定，發(fā)現(xiàn)6 例血清中有V p l 特異性抗體，其中5 例為C ．T ( + )患者的血清，1 例為正常人血清。結(jié)論：利用自行設(shè)計的C ．T 噬菌體V