99mTc-vMIP-ⅡN端肽在乳腺癌分子顯像的實驗研究.pdf

1、目的：探討特異性結(jié)合趨化因子4受體(Cytokine receptor4,CXCR4),來源于病毒巨噬細(xì)胞炎性蛋白Ⅱ(virus macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21個氨基酸的多肽(NT21MP)在乳腺癌靶向診斷的應(yīng)用價值;探索具有較高放化純度和良好穩(wěn)定性的99mTc直接標(biāo)記NT21MP的方法,篩選最佳標(biāo)記條件,建立一種簡便可靠的99mTc-NT21MP制備方法;建立乳腺癌動物模型,

2、SPECT顯像探討99mTc-NT21MP對乳腺癌顯像的可行性;為99mTc-NT21MP在乳腺癌早期診斷中的應(yīng)用提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：①采用免疫熒光染色法檢測小鼠乳腺癌細(xì)胞4T-1中CXCR4的表達(dá)及NT21MP與CXCR4的結(jié)合;②采用預(yù)錫化法直接標(biāo)記NT21MP,紙層析法測標(biāo)記率及放化純度,篩選最佳標(biāo)記條件,并測其在生理鹽水或37℃人血清中不同時間點的放化純,觀測其體內(nèi)外穩(wěn)定性;③標(biāo)記好的99mTc-NT21MP與

3、SKBR3細(xì)胞進(jìn)行體外放射受體分析,通過飽和及抑制實驗,檢驗其受體結(jié)合活性;④制備荷乳腺癌細(xì)胞株4T-1細(xì)胞荷瘤鼠,實驗分為三組(空白對照組、生理鹽水組和NT21MP治療組),建模后第3周,局部出現(xiàn)明顯腫塊后,尾靜脈注射3.7MBq(0.1ml)99mTc-NT21MP,于注射后0.5h、1h和2h進(jìn)行SPECT顯像,用ROI分析靶(T)與非靶(NT)比值;⑤免疫組化法檢測荷乳腺癌小鼠原發(fā)腫瘤細(xì)胞中CXCR4的表達(dá);⑥荷乳腺癌小鼠原發(fā)腫

4、瘤的大小檢測。
　　結(jié)果：小鼠乳腺癌細(xì)胞株4T-1細(xì)胞中高表達(dá)CXCR4受體;未以滲透劑處理時,NT21MP與4T-1細(xì)胞膜上受體結(jié)合,以滲透劑處理后,NT21MP可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),與胞漿和胞核中CXCR4高效結(jié)合;以2μg肽、25μg SnCl2、100℃孵育15min標(biāo)記率最高,游離99mTc為0,膠體<5％,放化純最高達(dá)96%;標(biāo)記反應(yīng)中膠體含量小于5%;99mTc-NT21MP在37℃血漿中2h內(nèi)保持穩(wěn)定,放化純>85%,超過

5、2h后放化純下降較明顯;受體分析顯示大結(jié)果顯示:99mTc-NT21MP具有可飽和及抑制的受體結(jié)合特性,且親和力較高,RT=23.2174pmol,KD=0.4348nmol;SPECT顯像顯示99mTc-NT21MP注射后能迅速靶向腫瘤組織,生理鹽水組2h的T/NT達(dá)4.65,而NT21MP組T/NT則為1.38;NT21MP治療組原發(fā)瘤乳腺癌細(xì)胞的CXCR4表達(dá)較生理鹽水組下調(diào),且腫瘤生長抑制。
　　結(jié)論：99mTc-NT21