99mTc-AnnexinV靜脈血栓顯像的實驗研究.pdf

1、目的:探討以99mTc-Annexin V為血栓活化血小板顯像劑,進(jìn)行靜脈血栓放射性核素顯像及其用于鑒別新鮮與陳舊靜脈血栓的可行性。
　　 方法:
　　 1下腔靜脈血栓動物模型的建立:普通級新西蘭家兔3％戊巴比妥鈉1-1.3ml/kg耳緣靜脈注射麻醉,麻醉后固定于手術(shù)臺,右側(cè)腹備皮,沿腹直肌右外側(cè)線切開皮膚4-6cm切口,逐層鈍性分離腹壁肌肉、腹膜,入腹腔后鈍性分離后腹膜,暴露右腎下極水平以遠(yuǎn)約4cm長的下腔靜脈,將長約

2、3cm自制單股螺旋銅絲向心方向穿刺入下腔靜脈留置,縫合血管,止血,觀察下腔靜脈回流通暢后回納腸管,逐層縫合腹膜、肌肉、皮膚。
　　 2分組:將普通級新西蘭家兔24只,隨機(jī)分成4組,ANX V(99mTc-AnnexinV,以下同)新鮮血栓組、ANX V陳舊血栓組、HAS(99mTc-人血清白蛋白,以下同)新鮮血栓組、ANX V假手術(shù)組,前三組按前述方法制備下腔靜脈血栓模型,ANX V假手術(shù)組只行開腹手術(shù)做為對照,未在下腔靜脈穿刺

3、置銅絲。
　　 399mTc-Annexin V、99mTc-人血清白蛋白標(biāo)記:99mTc-Annexin V標(biāo)記,取一潔凈反應(yīng)瓶,依次加入Annexin V30μg、ACD溶液500μl、10mg/ml酒石酸鉀鈉溶液100μl、新鮮SnCl2/HCl溶液10μl,震蕩搖勻,于2-4℃冷藏靜置20min,加入新鮮淋洗的高锝酸鈉溶液1ml(1110MBq/ml),室溫下靜置反應(yīng)20min,標(biāo)記完畢。99mTc-HAS標(biāo)記參照藥盒說

4、明書。
　　 4活體及離體顯像:ANX V新鮮血栓組、ANX V假手術(shù)組兩組于手術(shù)后22-26h行99mTc-Annexin V顯像,ANX V陳舊血栓組于造模術(shù)后14天行99mTc-Armexin V顯像,HAS新鮮血栓組于造模術(shù)后22-26h行99mTc-HAS顯像。分別于注入顯像劑后20min、40min、60min、90min和2h進(jìn)行靜態(tài)平面顯像。SPECT儀采用低能高分辨準(zhǔn)直器,能峰:140keV,窗寬:20％。采集

5、:1000K計數(shù),矩陣:256×256,放大:2倍。在核素顯像結(jié)束后,利用SPECT儀所帶的CT,對各血栓組實驗兔行CT掃描。另ANX V新鮮血栓組三只實驗兔處死后,切取約4厘米長內(nèi)含血栓下腔靜脈,行離體組織顯像,能峰:140keV,窗寬:20％。采集:50K計數(shù),矩陣:128×128,放大:4倍。
　　 5圖像分析:分別在各血栓組實驗兔所得圖像上勾畫下腔靜脈血栓部位和右后肢根部的等面積感興趣區(qū)(ROI),ROI面積為20個像素

6、(以下同),后者作為本底,計算血栓部位與本底(T/B)放射性比值。ANX V假手術(shù)組于與血栓組血栓部位對應(yīng)下腔靜脈部位(緊鄰右腎下極水平以遠(yuǎn)下腔靜脈,以下簡稱對應(yīng)下腔靜脈)和右后肢根部(做為本底區(qū))勾畫等面積ROI,計算對應(yīng)下腔靜脈部位與本底(T/B)放射性比值。以及計算各血栓組血栓部位及假手術(shù)組對應(yīng)下腔靜脈部位分別與頭側(cè)下腔靜脈(血栓頭側(cè)緊鄰右腎上極以上水平下腔靜脈,以下同)等面積ROI的放射性比值。
　　 6離體組織百分注射

7、劑量率測算:顯像完畢注射過量戊巴比妥鈉處死動物,ANX V新鮮血栓組、ANX V陳舊血栓組,分別取血栓、血液、血栓部位下腔靜脈、頭側(cè)下腔靜脈、后肢肌肉、胃、心、肺、肝、腎、脾、骨及小腸組織。ANX V假手術(shù)組取右腎下極水平以遠(yuǎn)約3cm靜脈血管及上述除血栓和頭側(cè)下腔靜脈的其他臟器組織,HAS新鮮血栓組取血栓、血液、血栓部位下腔靜脈、頭側(cè)下腔靜脈及后肢肌肉組織。將上述所取組織生理鹽水沖洗干凈,紗布粘干,測所取各組織及血液放射性計數(shù)并準(zhǔn)確稱重

8、,計算所取標(biāo)本的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)。計算各血栓組血栓分別與血液、血栓部位下腔靜脈、頭側(cè)下腔靜脈、肌肉的每克組織百分注射劑量率的比值。
　　 7病理:留取各血栓組血栓標(biāo)本立即置于福爾馬林固定液中,將所留存血栓標(biāo)本HE染色確定血栓病理特征。
　　 結(jié)果:
　　 199mTc-Annexin V活體顯像,ANX V新鮮血栓組5只新鮮血栓模型實驗兔中,4只下腔靜脈血栓部位可見清晰放射性濃聚影,1只隱約可

9、見血栓部位放射性增濃影,CT掃描顯示銅絲部位與血栓顯影部位一致,顯影出現(xiàn)時間由20-90分鐘不等,逐漸增濃后減淡。ANX V陳舊血栓組、HAS新鮮血栓組平面顯像實驗兔血栓部位均未見放射性濃聚,ANX V假手術(shù)組實驗兔下腔靜脈走行區(qū)均未見放射性濃聚。將.ANX V新鮮血栓組三只實驗兔約4厘米內(nèi)含血栓下腔靜脈離體標(biāo)本顯像,可見血栓部位放射性濃聚,內(nèi)無血栓下腔靜脈部位呈略高于本底淡影。
　　 2靜態(tài)平面顯像ANX V新鮮血栓組血栓部位

10、/頭側(cè)下腔靜脈部位、血栓部位/本底等面積ROI放射性比值(1.62±0.26、4.06±0.49)高于ANX V陳舊血栓組(1.03±0.18、2.46±0.38)和HAS新鮮血栓組(0.99±0.09、2.16±0.24),P均＜0.05,也高于ANX V假手術(shù)組對應(yīng)下腔靜脈部位/頭側(cè)下腔靜脈部位、對應(yīng)下腔靜脈部位/本底等面積ROI放射性比值(0.96±0.05、2.27±0.24),P均＜0.05。ANX V新鮮血栓組血栓百分注射劑

11、量率(0.01894±0.00216％ID/g)高于ANX V陳舊血栓組(0.00473±0.00128％ID/g)、HAS新鮮血栓組(0.00345±0.00110％ID/g),P均＜0.05。ANX V新鮮血栓組血栓分別與血液、血栓部位下腔靜脈血管、頭側(cè)下腔靜脈血管、肌肉的組織百分注射劑量率比值(3.42±1.06、26.32±13.60、31.23±16.00、111.62±52.23)也均高于ANX V陳舊血栓組(0.98±0.

12、09、5.12±2.01、6.25±2.38、21.82±5.93)、HAS新鮮血栓組(0.77±0.08、2.45±0.62、2.62±0.87、9.91±4.51),P均＜0.05。
　　 3 ANX V新鮮血栓組1只隱約顯影實驗兔血栓病理為混合血栓但紅色血栓居多;余ANX V新鮮血栓組及HAS新鮮血栓組血栓病理均為新鮮混合血栓;ANX V陳舊血栓組血栓病理均為陳舊機(jī)化混合血栓。結(jié)論:99mTc-Annexin V實驗動物活