全腦缺血再灌注大鼠海馬Fas凋亡通路激活及HWTX-Ⅰ干預(yù)研究.pdf

1、目的：通過觀察HWTX-I 大鼠蛛網(wǎng)膜下腔用藥對全腦缺血再灌注損傷在體動物模型海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞及胞內(nèi)線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)變化、Fas凋亡通路相關(guān)因子核酸及蛋白表達(dá)的影響，探討HWTX-I與由Fas分子啟動的死亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間的關(guān)系，確定其在以上模型中神經(jīng)保護(hù)有效性和可能分子機(jī)制，為開發(fā)一種新型神經(jīng)保護(hù)作用藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：成年雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為3組，即假手術(shù)組、非用藥組和 HWTX-I1.0μg/kg

2、劑量用藥組，每組16只；每組8只用于光鏡觀察海馬CAl區(qū)Nissl染色錐體細(xì)胞顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，電鏡觀察海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)變化和免疫組化技術(shù)檢測海馬CA1區(qū)Fas凋亡通路相關(guān)因子蛋白表達(dá)變化；另8只用于PCR技術(shù)檢測海馬Fas凋亡通路相關(guān)因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平變化；除假手術(shù)組大鼠外，非用藥組和用藥組大鼠都以“四血管閉塞法”構(gòu)建全腦缺血再灌流損傷在體動物模型并結(jié)合蛛網(wǎng)膜下腔置管術(shù)。 研究結(jié)果： 1．光鏡觀察：在

3、假手術(shù)組中，清晰可見數(shù)層錐體細(xì)胞排列整齊緊密；在非用藥組中，錐體細(xì)胞排列散亂，分布稀疏，層次不完整；在用藥組中，錐體細(xì)胞略呈疏散分布狀態(tài)。 2．電鏡觀察：在假手術(shù)組中，錐體細(xì)胞線粒體嵴清晰可見，未見其出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象：在非用藥組中，錐體細(xì)胞線粒體嵴模糊不清，出現(xiàn)線粒體嵴斷裂和線粒體空泡化現(xiàn)象；在用藥組中，錐體細(xì)胞線粒體嵴未出現(xiàn)明顯斷裂現(xiàn)象。 3．免疫組化定性實(shí)驗(yàn)：在假手術(shù)組中，幾乎未見Fas、FasL(CD95L)、FADD

4、、Caspase-3 及 Caspase-8蛋白表達(dá)；在非用藥組中，陽性細(xì)胞數(shù)量多，較假手術(shù)組和用藥組有更強(qiáng) Fas、FasL、FADD、Caspase-3及 Caspase-8 蛋白表達(dá)；在用藥組中，陽性細(xì)胞分布明顯較非用藥組少而稀疏。 4．免疫組化半定量實(shí)驗(yàn)：Fas、FasL、FADD、Caspase-3 及 Caspase-8陽性單位均值以非用藥組為最高，其次是用藥組，而假手術(shù)組最低；非用藥組、用藥組Fas蛋白表達(dá)與假手術(shù)

5、組比較，差異具有非常顯著性意義(P<0.01)，用藥組與非用藥組比較差異具有顯著性意義(P<0.05)；非用藥組FasL蛋白表達(dá)與假手術(shù)組比較，差異具有非常顯著性意義(P<0.01)，用藥組與假手術(shù)組比較，差異具有顯著性意義(P<0.05)；非用藥組、用藥組FADD蛋白表達(dá)與假手術(shù)組比較，差異具有非常顯著性意義(P<0.01)，用藥組與非用藥組比較差異具有顯著性意義(P<0.05)；非用藥組Caspase-3、Caspase-8 蛋白表

6、達(dá)與假手術(shù)組比較，差異具有非常顯著性意義(P<0.01)，用藥組與非用藥組比較，差異具有顯著性意義(P<0.05)；HWTX-I 具有較明顯降低全缺血再灌注大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞Fas調(diào)亡通路相關(guān)因子蛋白表達(dá)水平作用。 5.RT-PCR技術(shù)檢測：非用藥組Fas、FasL、FADD及 Caspase-3 mRNA表達(dá)量與假手術(shù)組比較，差異都具有非常顯著性意義(P<0.01)；非用藥組 Caspase-8 表達(dá)量與假手術(shù)組比較，差

7、異具有顯著性意義(P<0.05)；用藥組 Fas、FasL、Caspase-3 及 Caspase-8 mRNA 表達(dá)與非用藥組比較差異都具有顯著性意義(P<0.05)；用藥組 FADDmRNA 表達(dá)與非用藥組比較，差異具有非常顯著性意義(P<0.01)；HWTX-I具有較明顯降低全腦缺血再灌注大鼠海馬細(xì)胞Fas調(diào)亡通路相關(guān)因子核酸表達(dá)水平作用。 結(jié)論： 1.HWTX-I蛛網(wǎng)膜下腔用藥具有穩(wěn)定全腦缺血再灌注損傷SD大鼠海