白介素-6、gp130與Graves病關(guān)系研究.pdf

1、本論文分三部分，初步研究了白介素-6(IL-6)/gp130信號(hào)通路與Graves病(GD)的關(guān)系。 第一部分GD患者血清IL-6水平變化[目的]研究GD患者經(jīng)抗甲亢藥物治療前后不同時(shí)期血清IL-6水平變化情況。 [材料與方法]1.對(duì)象及分組26例GD患者，其中有13例為初發(fā)期未治療組病人，追蹤隨訪至其抗甲亢治療維持期，另外13例為抗甲亢停藥后的GD病人，正常對(duì)照組為13例健康志愿者。 2.血清IL-6的測(cè)定空腹

2、狀態(tài)下采外周靜脈血，離心取血清。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)血清IL-6進(jìn)行測(cè)定 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。初發(fā)期組與維持期組采用配對(duì)t檢驗(yàn)。其他各組間比較采用方差分析。p＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果]GD初發(fā)期患者其血清IL-6水平(2.52±1.30pg/ml)較對(duì)照組(1.44±0.59pg/ml)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)；用藥治療至維持期血清IL-6水

3、平下降至1.53±0.96pg/ml，與初發(fā)期組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；維持期組與對(duì)照組IL-6水平比較無(wú)顯著性差異；停藥組病人IL-6水平回升(2.42±1.07pg/ml)，與初發(fā)期組無(wú)顯著性差異，高于維持期組病人和正常對(duì)照組水平(P均＜0.05)。 [結(jié)論]GD患者血清IL-6水平變化規(guī)律：初發(fā)期明顯升高，應(yīng)用抗甲狀腺藥物治療至維持期濃度下降，但至停藥期可能由于免疫損傷原因IL-6水平回升。 第二部

4、分Graves病外周血單個(gè)核細(xì)胞gP130mRNA的表達(dá)[目的]研究GD患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)內(nèi)gp130mRNA在抗甲亢藥物治療前后不同時(shí)期的表達(dá)情況。 [材料與方法]1.對(duì)象及分組同第一部分。2.PBMCs內(nèi)gp130mRNA表達(dá)的檢測(cè)空腹采集外周靜脈血密度梯度離心分離制備新鮮PBMCs，用細(xì)胞原位雜交技術(shù)檢測(cè)GD患者及對(duì)照組PBMCs內(nèi)gp130mRNA的表達(dá)。應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量。 3.統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)分析所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用方差分析。p＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果]1.顯微鏡下定性觀察：gp130mRNA原位雜交棕黃色陽(yáng)性物質(zhì)主要分布在細(xì)胞膜附近，胞漿著色較淺。GD初發(fā)期組病人外周血單個(gè)核細(xì)胞gp130mRNA雜交染色最深，可見(jiàn)濃染的團(tuán)塊棕黃色顆粒；維持期組、停藥期組染色逐漸變淺，后者與正常對(duì)照組鏡下觀察大致相同。 2.原位雜交半定量分析顯示：正常對(duì)照組外

6、周血單個(gè)核細(xì)胞僅有少量的gp130mRNA表達(dá)(16.02±4.77)，GD患者gp130mRNA表達(dá)量較對(duì)照組高，其中初發(fā)期組病人表達(dá)量最高(28.51±6.63)，經(jīng)治療至維持期gp130mRNA表達(dá)量明顯降低(22.25±2.92)，但仍較正常對(duì)照組高(P=0.015)；停藥組病人gp130mRNA表達(dá)量(17.98±8.01)與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，明顯低于初發(fā)組病人。 [結(jié)論]GD患者外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)gp130

7、mRNA表達(dá)被激活，初發(fā)期組表達(dá)程度最高，隨甲亢治療好轉(zhuǎn)逐漸恢復(fù)至正常。 第三部分Graves病患者甲狀腺組織IL-6及其受體的表達(dá)[目的]研究GD患者甲狀腺組織內(nèi)IL-6及其受體(gp80、gp130)的表達(dá)情況。 [材料與方法]1.對(duì)象及分組GD手術(shù)患者8例，對(duì)照組為8例甲狀腺功能正常的結(jié)節(jié)性甲狀腺腫或良性甲狀腺瘤患者。 2.RT-PCR檢測(cè)IL-6、gp80、gp130mPNA的表達(dá)含量GD組和對(duì)照組取術(shù)中

8、切除甲狀腺組織，提取RNA，RT-PCR檢測(cè)IL-6，gp80、gp130,以B-actin為內(nèi)參，計(jì)算相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度。 3.免疫組化檢測(cè)IL-6的表達(dá)甲狀腺組織石蠟切片行IL-6免疫組織化學(xué)染色，采用全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算IL-6陽(yáng)性單位表達(dá)值。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用t檢驗(yàn)。p＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果]1.甲狀腺組織IL-6、gp80、

9、gp130mRNA的表達(dá)8例GD患者中有6例甲狀腺組織內(nèi)有明顯的IL-6mRNA表達(dá)，而對(duì)照組只有2例可見(jiàn)IL-6mRNA表達(dá)；GD組與對(duì)照組均檢測(cè)出gp80mRNA的表達(dá)；除對(duì)照組中有1例外，其他樣本均檢測(cè)出gp130mRNA表達(dá)。GD組甲狀腺組織內(nèi)IL-6mRNA(0.1550±0.1137)、gp130mRNA(0.7556±0.1888)均較對(duì)照組的表達(dá)(0.0392±0.0741和0.5622±0.1211)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)意義。gp80mRNA在兩組間的表達(dá)水平尚無(wú)顯著性差異。 2.甲狀腺組織IL-6免疫組化染色結(jié)果7例GD中甲狀腺濾泡細(xì)胞胞漿內(nèi)有片狀、團(tuán)塊狀I(lǐng)L-6表達(dá)，在浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞內(nèi)也可見(jiàn)IL-6陽(yáng)性表達(dá)。8例對(duì)照組甲狀腺濾泡細(xì)胞內(nèi)僅有4例有散在分布表達(dá)，且染色較淺，浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。定量分析示：GD組IL-6水平較對(duì)照組升高(22.69±3.12vs19.62±2.32)，二者比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P=0.043) [