NO介導(dǎo)的結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用在腫瘤血管生成中作用的研究.pdf

1、研究目的 1．觀察結(jié)腸癌LoVb細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。 2．觀察結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用對(duì)NO產(chǎn)生、NOS活力、促血管生成因子和信號(hào)通路分子表達(dá)及內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響，探討這種細(xì)胞間相互作用在腫瘤血管生成中的作用。 3．明確NO在結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞間相互作用中的介導(dǎo)作用，及L-NAME的干預(yù)。 4．建立體外研究腫瘤血管生成的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?研究方法

2、 1．利用結(jié)腸癌LoVb細(xì)胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，并設(shè)對(duì)照組、L-NAME干預(yù)組和L-NAME對(duì)照組，培養(yǎng)0h、24h、48h后，用MTT法檢測(cè)各組HUVECs增殖情況。 2．采用雙層共培養(yǎng)方法，建立結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞與HUVECs相互作用模型，設(shè)HUEVCs自身共培養(yǎng)對(duì)照組、L-NAME干預(yù)組和L-NAME對(duì)照組，培養(yǎng)0h、12h、24h、36h、48h后采用分光光度比色法檢測(cè)共培養(yǎng)上清中NO

3、含量和NOS的活力，觀察共培養(yǎng)的HUVECs形態(tài)學(xué)改變，采用免疫細(xì)胞化學(xué)法、Western Blotting分別檢測(cè)HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7及NF．KBp65表達(dá)情況。 研究結(jié)果 1．條件培養(yǎng)組HUVECs增殖活力明顯強(qiáng)于對(duì)照組(P<0.05)，L—NAME干預(yù)組HUVECs增殖活力較條件培養(yǎng)組下降(P<0.05)，L-NAME對(duì)照組HUVECs的增殖情況與對(duì)照組相比沒(méi)有

4、明顯差異(P>0.05)。 2．HUVECs與結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，共培養(yǎng)上清中NO含量、NOS的活力明顯強(qiáng)于對(duì)照組(P<0.05)，L-NAME干預(yù)組培養(yǎng)上清中NO含量降低、NOS的活力顯著降低(P<0.05)，L-NAME對(duì)照組與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(P>0.05)。 3．HUVECs與結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7表達(dá)較對(duì)照組增高(P<

5、0.05)，NF-KBp65活化；L-NAME干預(yù)組上述因子表達(dá)較共培養(yǎng)組降低(P<0.05)，NF-KBp65的活化受到抑制；L-NAME對(duì)照組與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(P>0.05)。 4．HUVECs與結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，HUVECs形態(tài)明顯改變，形成大量管樣結(jié)構(gòu)，對(duì)照組HUVECs形態(tài)多呈圓形、多邊形，未見(jiàn)管樣結(jié)構(gòu)形成；L-NAME干預(yù)組HUVECs為圓形或多邊形，管樣結(jié)構(gòu)基本消失；L-NAME對(duì)照組HUVE

6、Cs形態(tài)與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異。 研究結(jié)論 1．LoVo細(xì)胞能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖。 2．LoVo細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間存在異常的相互作用，這種異常相互作用促進(jìn)腫瘤血管生成。 3．NO是LoVo細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞間相互作用的關(guān)鍵信號(hào)，NO可能通過(guò)活化NF-KB信號(hào)通路，上調(diào)促血管生成因子的表達(dá)。 4．L-NAME通過(guò)抑制 NO 的產(chǎn)生阻斷 LoVo 細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞間異常的相互作用，從而