TKTL1在人類結(jié)腸癌細(xì)胞株(LoVo)生長增殖中的作用機(jī)制.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：TKTL1靶向RNA干擾重組體的構(gòu)建及序列分析。
　　 目的：本研究利用RNA干擾技術(shù)，以TKTL1為靶基因，設(shè)計(jì)構(gòu)建重組體，并進(jìn)行序列分析，為下一步探索腫瘤基因治療的新途徑打好基礎(chǔ)。
　　 方法：設(shè)計(jì)有小發(fā)夾結(jié)構(gòu)的兩條DNA序列,經(jīng)退火形成互補(bǔ)雙鏈,再克隆至載體pEGFP-C1-U6中構(gòu)建重組體,轉(zhuǎn)化DH5а菌株,提取質(zhì)粒行酶切鑒定后,進(jìn)行測序分析。
　　 結(jié)果：將合

2、成的DNA序列退火后克隆到載體上,經(jīng)測序鑒定確實(shí)為所需序列。
　　 結(jié)論: TKTL1靶向RNA干擾重組體的成功構(gòu)建和序列分析,可進(jìn)一步利用克隆所得的小RNA序列干擾TKTL1的mRNA轉(zhuǎn)錄,從而達(dá)到治療腫瘤的目的。
　　 第二部分：TKTL1基因?qū)θ祟惤Y(jié)腸癌細(xì)胞株生長增殖的影響。
　　 目的：探討轉(zhuǎn)酮酶樣基因TKTL1在體外培養(yǎng)的人類結(jié)腸癌細(xì)胞株（LoVo）生長增殖中的作用。
　　 方法：將攜帶針對(duì)TK

3、TL1的小干擾RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人類結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR檢測轉(zhuǎn)染前后LoVo細(xì)胞轉(zhuǎn)酮酶基因家族（TKT、TKTL1、TKTL2）mRNA表達(dá)水平的變化，連續(xù)監(jiān)測法檢測總轉(zhuǎn)酮酶活性的變化，通過流式細(xì)胞術(shù)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染前后LoVo細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的改變。
　　 結(jié)果：LoVo細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組（攜帶有pEGFP-C1-U6/TKTL1）、質(zhì)粒對(duì)照組(攜帶有（pEGFP-C1-U6/UC）和空白對(duì)照組（未經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞）中TKT