法呢基焦磷酸合酶基因（fps）轉(zhuǎn)化煙草的研究.pdf

1、將已克隆的薄荷(MenthaspicataL.)法呢基焦磷酸合酶(farnesyldiphosphatesynthase,fps)的cDNA插入載體中，構(gòu)建CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的植物表達(dá)載體pBinARfps。用捕獲該質(zhì)粒的根癌農(nóng)桿菌菌株LBA4404與煙草k326葉片外植體共培養(yǎng)，并在附加30mg/LKan的MS+0.1mg/LIAA+1.5mg/LBA的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)植株分化，再生芽在附加30mg/LKan的MS培養(yǎng)基上生根，實(shí)

2、現(xiàn)再生植株。Kan陽性植株經(jīng)PCR-Southern檢測(cè)篩選，得到5株P(guān)CR陽性植株(K-4；K-6；K-17；K-19；K-35)，證明外源fps基因在煙草基因組中的整合；Northernblot檢測(cè)證明外源fps基因在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了表達(dá)。酶活測(cè)定結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因株系中FPS酶活性普遍明顯提高，K-4株系的酶活性是陰性對(duì)照的3.15倍。轉(zhuǎn)基因植株室內(nèi)離體葉片接種赤星病和活體接種黑脛病及大田抗病性試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因植株抗性明顯提高。表明f

3、ps基因在植物抗病基因工程中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。 利用基因分離原理，經(jīng)T1代單株種子Kan初步篩選獲得T2代純系，并進(jìn)行純系的大田試驗(yàn)。純系田間長勢(shì)好，群體整齊度高，株型、葉形、葉數(shù)、葉色、產(chǎn)量等性狀均較陰性對(duì)照有所改善；各株系的化學(xué)成分相比陰性對(duì)照來講，總糖和還原糖含量下降，煙堿含量升高，但是都在適宜范圍內(nèi)；煙葉類胡蘿卜素含量有較大差異，與未轉(zhuǎn)基因?qū)φ障啾绕毡橛兴岣?，其中K-35含量最高；利用GS/MS對(duì)烤后煙萜烯類香氣物質(zhì)進(jìn)