分月扇舟蛾顆粒體病毒病理、毒力及蛋白基因的研究.pdf

1、本文以分月扇舟蛾顆粒體病毒為研究對(duì)象，通過(guò)電鏡觀察、室內(nèi)生物測(cè)定、石蠟切片等方法，系統(tǒng)研究了該病毒的超微結(jié)構(gòu)、病毒毒力以及野外防治的效果；最后通過(guò)提取病毒的DNA，從基因組中擴(kuò)增出顆粒體蛋白基因，對(duì)其核苷酸序列與蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，為研究該基因在病毒感染中的作用提供依據(jù)。 本研究取得以下研究成果： (1)在分月扇舟蛾顆粒體病毒超微結(jié)構(gòu)的試驗(yàn)中，通過(guò)掃描電鏡和透射電鏡觀察到，病毒顆粒體形態(tài)呈橢圓形或卵圓

2、形，有的呈現(xiàn)不規(guī)則形，形態(tài)平均大小為428.54×237.96nm；在透射電鏡下顯示病毒桿、內(nèi)膜與囊膜構(gòu)成病毒粒子，病毒粒子平均大小為223.44×58.51nm。 (2)分月扇舟蛾顆粒體病毒的室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度對(duì)數(shù)和死亡幾率值的回歸直線方程為y=1.946+0.558x，LC50為2.97×105PIB·mL-1。1.58×105PIB·mL-1，1.58×106PIB·mL-1、1.58×107PIB·mL-1、

3、1.58×108PIB·mL-1、1.58×109PIB·mL-1w的半致死時(shí)間(LT50)分別為8.55d，6.89d，5.9d，4.65d，4.08d，隨著濃度的增大，LT50逐漸縮短。 (3)通過(guò)對(duì)取食病毒不同時(shí)間的幼蟲(chóng)制作石蠟切片，在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，顆粒體病毒可在中腸細(xì)胞中形成，細(xì)胞核變大，使中腸細(xì)胞嚴(yán)重變形，但不侵染馬氏管和圍食膜。 (4)在顆粒體蛋白基因的研究中，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到498bp片段，測(cè)序后

4、將所得序列與CacGV、PsGVA25-6、CpGVA11-2、AoGVS45、CmGVA11-1、HcGVA5-1的相應(yīng)區(qū)段進(jìn)行序列比較，其中與楊扇舟蛾顆粒體病毒(CacGV)蛋白基因的相似性最高；對(duì)該基因的蛋白質(zhì)基本性質(zhì)進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示存在一個(gè)明顯的疏水區(qū)，沒(méi)有顯著意義的跨膜區(qū)，同一氨基酸在使用不同的密碼子上存在一定的偏向性；蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明該基因分別由α螺旋(38.55％)、β折疊(18.07％)、β轉(zhuǎn)角(10.24％