缺血后適應(yīng)對心肌微循環(huán)的影響及機制研究.pdf

1、目的：建立兔心肌急性缺血再灌注模型，通過心肌聲學(xué)造影來觀察缺血后適應(yīng)對心肌微循環(huán)的影響，同時探討其作用機制。
　　方法：100只新西蘭大白兔隨機分為假手術(shù)(Sham)組、心肌梗死(AMI)組、缺血再灌注(I/R)組、缺血后適應(yīng)(IPostC)組及缺血后適應(yīng)+卟啉鋅（Znpp）組五組，每組20只。假手術(shù)組為只開胸，在前降支下穿線不結(jié)扎而后關(guān)胸；心肌梗死組開胸結(jié)扎前降支后直接關(guān)胸；缺血再灌注組開胸結(jié)扎前降支1小時—再灌注2小時后關(guān)胸；

2、缺血后適應(yīng)組開胸結(jié)扎前降支1小時—再灌注30秒，再結(jié)扎30秒（重復(fù)4次），灌注2小時后關(guān)胸；缺血后適應(yīng)+Znpp組在結(jié)扎前10分鐘靜脈給予Znpp0.2mg/kg推注，余步驟同IPostC組。術(shù)中持續(xù)心電監(jiān)護(hù)，并分別于左前降支結(jié)扎前、結(jié)扎后10分鐘和再灌注后2小時記錄Ⅰ導(dǎo)聯(lián)心電圖。各組兔子于開胸前、結(jié)扎后3小時及實驗后1周處死前經(jīng)股靜脈或頸內(nèi)靜脈抽取3ml血樣，用EDTA-Na2抗凝劑1:9抗凝，室溫3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，獲得貧含

3、血小板的血清-20℃保存待用，測定血清肌鈣蛋白I、高敏C-反應(yīng)蛋白、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛(MDA)濃度。飼養(yǎng)1周行心臟超聲及左室心肌聲學(xué)造影檢查，取得圖像后脫機應(yīng)用EchoPAC-7超聲圖像工作站進(jìn)行分析。在左室乳頭肌水平短軸切面6個節(jié)段舒張期內(nèi)選擇感興趣區(qū)域。以微氣泡開始再灌注的第1幀為原點，繪制感興趣區(qū)域心肌的時間-強度曲線。在微泡再填充的過程中，心肌視頻強度(Y)的變化與造影劑再充填時間(t)之間的關(guān)系可以用Y=A×(

4、1-e-Bt)來擬合, B為曲線上升的斜率，代表微氣泡再充填平均速率即心肌血流速度,單位為S-1；A為平臺時期的視頻強度，反映心肌血容量，單位為dB。A×B則代表感興趣心肌內(nèi)的絕對血流量，單位為dB×S-1，感興趣區(qū)容積相同時, A×B則可直接反映局部心肌血流灌注。一周后兔子經(jīng)耳緣靜脈緩慢推注3%戊巴比妥鈉溶液麻醉后取心臟，分離出左心室心肌。5只心臟標(biāo)本于冠脈穿線處下5mm剪取一小塊左心室心肌行組織形態(tài)學(xué)檢查并測定梗死面積。余15只心臟

5、組織通過Western Blot檢測Nrf2及HO-1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各組兔子在體重和性別上無差異（P>0.05）。
　　2.血管結(jié)扎的四組心電圖均可見Ⅰ導(dǎo)聯(lián)ST段弓背上抬，結(jié)扎后3小時除心肌梗死組外心電圖均可見ST段回落，其中回落>50%個數(shù)各組無顯著性差異（P>0.05）。
　　3.血清肌鈣蛋白I在結(jié)扎前各組無顯著性差異，結(jié)扎的四組肌鈣蛋白I高于假手術(shù)組，結(jié)扎四組中缺血后適應(yīng)組肌鈣蛋白I低于其

6、余三組，有顯著性差異（P<0.05），其優(yōu)勢保持到一周后。
　　4.血清高敏C-反應(yīng)蛋白在結(jié)扎四組中結(jié)扎3小時后缺血后適應(yīng)組濃度低于其余三組，有顯著性差異（P<0.05），一周后無顯著性差異(P>0.05)。
　　5.血清超氧化物歧化酶在結(jié)扎四組中結(jié)扎3小時后缺血后適應(yīng)組及缺血后適應(yīng)組+Znpp組濃度高于心肌梗死組及缺血再灌注組，有顯著性差異（P<0.05），其優(yōu)勢保持到一周后。
　　6.血清丙二醛在結(jié)扎四組中結(jié)扎3小

7、時后缺血后適應(yīng)組丙二醛低于其余三組，有顯著性差異（P<0.05），一周后無顯著性差異(P>0.05)。
　　7.左室乳頭肌短軸切面行心肌聲學(xué)造影定量分析：假手術(shù)組前壁、前側(cè)壁、下側(cè)壁、下壁、后間隔及前間隔的心肌血容量（A值）、心肌血流速度（B值）及局部心肌血流灌注量（A×B值）無顯著性差異(P<0.05)。結(jié)扎四組中前壁、前側(cè)壁及前間隔A值、B值及A×B值均低于下側(cè)壁、下壁及后間隔，有顯著性差異(P<0.05)，前壁、前側(cè)壁及前間

8、隔A值、B值及A×B值兩兩比較無顯著性差異（P>0.05），下側(cè)壁、下壁及后間隔A值、B值及A×B值兩兩比較無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)扎四組中前壁、前側(cè)壁及前間隔組間比較缺血后適應(yīng)組A值、B值及A×B值均高于心肌梗死、缺血再灌注及缺血后適應(yīng)+Znpp組，有顯著性差異（P<0.05）；心肌梗死組A值、B值及AB值低于缺血后適應(yīng)+Znpp組，有顯著性差異(P<0.05)；心肌梗死組A值、B值及AB值低于缺血再灌注組，有顯著性差異（P<

9、0.05）；缺血再灌注組與缺血后適應(yīng)+Znpp組比較A值、B值及AB值均無顯著性差異(P>0.05)；缺血后適應(yīng)組前壁、前側(cè)壁及前間隔B值與假手術(shù)組比無顯著性差異(P>0.05)。
　　8.左室乳頭肌水平短軸切面心肌節(jié)段圓周應(yīng)變峰值分析：缺血后適應(yīng)組前壁、前側(cè)壁及前間隔圓周應(yīng)變峰值高于心肌梗死組、缺血再灌注組及缺血后適應(yīng)+Znpp組，有顯著性差異（P<0.05）。心肌梗死組、缺血再灌注組及缺血后適應(yīng)+Znpp組之間前壁、前側(cè)壁及前

10、間隔圓周應(yīng)變峰值無顯著性差異(P>0.05)。
　　9.心肌梗死面積測定：結(jié)扎四組中缺血后適應(yīng)組梗死面積小于其余三組，有顯著性差異（P<0.05）。
　　10.光鏡下檢查結(jié)扎四組中缺血后適應(yīng)組損傷輕于其余三組；正常心肌組織血管中未見造影劑儲留及相關(guān)血栓形成。
　　11.心肌細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)：假手術(shù)、心肌梗死組Nrf2表達(dá)明顯低于缺血再灌注、缺血后適應(yīng)及缺血后適應(yīng)+Znpp組（P<0.05）；缺血后適應(yīng)及缺血后適

11、應(yīng)+Znpp組Nrf2表達(dá)明顯高于缺血再灌注組（P<0.05）；缺血后適應(yīng)組與缺血后適應(yīng)+Znpp組Nrf2表達(dá)明顯無顯著性差異(P>0.05)。
　　12.心肌細(xì)胞漿內(nèi)HO-1蛋白表達(dá)：缺血后適應(yīng)、缺血再灌注組HO-1蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)、心肌梗死及缺血后適應(yīng)+Znpp組（P<0.05）；缺血后適應(yīng)組HO-1蛋白表達(dá)明顯高于缺血再灌注組（P<0.05）；假手術(shù)、心肌梗死及缺血后適應(yīng)+Znpp組HO-1蛋白表達(dá)無顯著性差異（P>

12、0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.通過心肌聲學(xué)造影定量分析的方法發(fā)現(xiàn)缺血后適應(yīng)組無論在心肌血容量、心肌血流速度及局部心肌血流灌注量均高于其他結(jié)扎組，圓周應(yīng)變峰值也高于其他結(jié)扎組，說明缺血后適應(yīng)在改善心肌梗死心肌微循環(huán)的同時進(jìn)一步改善了心臟的收縮功能。
　　2.試驗各組行組織學(xué)檢查，光鏡下未發(fā)現(xiàn)造影劑潴留及相關(guān)血栓形成，證實心肌聲學(xué)造影檢查的安全可行性。
　　3.通過測定組織中Nrf2和HO-1濃度及血清SOD和M