siRNA沉默COX-2基因協(xié)同紫草素對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的:通過(guò)紫草素協(xié)同siRNA干擾胃癌細(xì)胞中COX-2基因,觀察并探討紫草素對(duì)胃癌細(xì)胞COX-2基因和VEGF-C基因表達(dá)以及胃癌細(xì)胞侵襲力和遷移能力的影響,研究紫草素協(xié)同siRNA抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制,為中藥紫草的抗癌應(yīng)用提供新的研究思路。
　　方法:將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-7901細(xì)胞分為:空白組、陰性對(duì)照組、紫草素協(xié)同組、siRNA干擾組、紫草素組;利用 siRNA沉默及紫草素協(xié)同干擾胃癌細(xì)胞的CO

2、X-2基因,RT-PCR檢測(cè)BGC-823和SGC-7901各組細(xì)胞中COX-2基因和VEGF-C基因mRNA水平的表達(dá)變化;免疫熒光方法從蛋白質(zhì)水平檢測(cè)BGC-823和SGC-7901各組細(xì)胞中COX-2和VEGF-C基因的表達(dá)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BGC-823和SGC-7901細(xì)胞siRNA干擾以及紫草素處理前后細(xì)胞遷移能力的變化;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)siRNA干擾前后以及紫草素協(xié)同siRNA組對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲力的影響。
　

3、　結(jié)果:胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-7901在siRNA干擾前后,細(xì)胞狀態(tài)無(wú)明顯變化。
　　(1)、RT-PCR結(jié)果顯示:空白組和陰性對(duì)照組細(xì)胞兩因子表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05);與空白組和陰性對(duì)照組比較,siRNA干擾組、紫草素協(xié)同組BGC-823和SGC-7901細(xì)胞中COX-2基因和VEGF-C基因的mRNA含量明顯降低(P<0.05),兩株胃癌細(xì)胞紫草素干擾組中VEGF-C基因mRNA含量無(wú)明顯下降(P>0.05);

4、與siRNA干擾組比較,紫草素協(xié)同組細(xì)胞VEGF-C基因mRNA的表達(dá)量無(wú)顯著性差異(P>0.05),紫草素協(xié)同組細(xì)胞COX-2基因mRNA有明顯差異,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(2)、細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:兩株細(xì)胞空白組和陰性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);與空白組和陰性對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn),siRNA干擾組和紫草素協(xié)同組胃癌細(xì)胞的COX-2和VEGF-C基因蛋白水平表達(dá)有明顯下降(P<0.05),兩組間V

5、EGF-C基因的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P>0.05),COX-2基因的表達(dá)變化差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);紫草素組胃癌細(xì)胞中COX-2基因表達(dá)量明顯下降(P<0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與空白組比較,紫草素組內(nèi)細(xì)胞VEGF-C的表達(dá)則無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　(3)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與空白組比較發(fā)現(xiàn),紫草素協(xié)同組、siRNA干擾組以及紫草素組細(xì)胞的遷移能力有下降趨勢(shì);Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:兩株細(xì)胞

6、空白組和陰性對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差異(P>0.05);與空白對(duì)照組比較,siRNA干擾組和紫草素協(xié)同組細(xì)胞的侵襲力明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),紫草素組則無(wú)明顯差異(P>0.05),
　　結(jié)論:siRNA能夠成功沉默胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-7901細(xì)胞中COX-2基因的表達(dá)。紫草素能夠在一定程度上抑制BGC-823和SGC-7901細(xì)胞總COX-2基因的表達(dá),但對(duì)VEGF-C基因作用不明顯;與siRNA