siRNA沉默VEGF基因?qū)CHN腎細(xì)胞癌細(xì)胞惡性生物學(xué)特征的影響.pdf

1、背景與目的:腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率約占成人全身惡性腫瘤的3％,其中80%為透明細(xì)胞癌,全球每年大約有200000人死于腎癌,而且發(fā)病率和死亡例數(shù)仍在不斷增加,外科手術(shù)是治療早期腎癌的有效手段之一,包括根治性腎切除術(shù)及腎部分切除術(shù),腎癌的總體5年生存率只有50-60%.腫瘤的生長依賴于血管的新生,抑制腫瘤血管生成已經(jīng)成為腫瘤治療的一種策略。VEGF可特異性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、參與血管生成、增加血管通透性等,在動物胚胎發(fā)育

2、、傷口修復(fù)、腫瘤發(fā)生等多種生理及病理過程中發(fā)揮重要作用。因此,VEGF及其受體成為目前抗腫瘤血管形成治療最為成熟的靶分子。RNAi技術(shù)不僅在功能基因組研究中發(fā)揮了重要用,而且是一種潛在的以特異性基因沉默為方法治療疾病的手段。尤其在腫瘤的干預(yù)中更具有潛在意義。本課題,利用RNAi技術(shù),沉默腎細(xì)胞癌細(xì)胞中VEGF的表達(dá),抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的增殖、生長、侵襲和遷移,為其臨床開發(fā)和探索腫瘤治療的新途徑提供實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。
　　方法:化學(xué)合

3、成針對VEGF的小干擾RNA,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞株ACHN中,收集細(xì)胞,通過蛋白印跡方法檢測VEGF的表達(dá),臺盼藍(lán)拒染法測定細(xì)胞生長曲線、MTT比色法檢測細(xì)胞增殖,TUNEL方法檢測凋亡率(AR)法檢測凋亡率(AR),細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞的黏附及遷移能力,Transwell法檢測細(xì)胞侵襲能力。
　　結(jié)果:siRNA1-2組VEGF蛋白表達(dá)水平明顯低于空白對照組及陰性對照組,生長曲線表明與空白對照組及陰性對照組相比,

4、siRNA1-2組ACHN細(xì)胞的生長明顯減慢。在24h、48h、72h,siRNA1組的增殖抑制率分別為18.9%、32.7%、40.3%和siRNA2組增殖抑制率分別為27.6%、50.6%、67.8%均高于空白對照組及陰性對照組(p﹤0.05);siRNA1組的細(xì)胞凋亡率為10.7%,15.9%,20.3%和siRNA2組的細(xì)胞凋亡率為17.3%,26.2%,37.4%均高于空白對照組及陰性對照組(p﹤0.05);其中siRNA2對

5、ACHN細(xì)胞的IR、AR和VEGF蛋白表達(dá)的抑制作用均顯著高于siRNA2組(p﹤0.05)。細(xì)胞黏附試驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對照組相比;siRNA1-2組的細(xì)胞黏附數(shù)量明顯下降(81.5±3.1%vs40.5±2.6%,p﹤0.05;81.5±3.1%vs22.5±2.4%,p﹤0.05),其中以siRNA2組最為明顯;劃痕試驗(yàn)表明,與空白對照組相比,siRNA1-2組的細(xì)胞遷移數(shù)量明顯下降(162±9vs81±5,p﹤0.05;162±

6、9vs38±4,p﹤0.05),Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對照組比較,siRNA1組和siRNA2組腎癌細(xì)胞侵襲能力明顯下降(P<0.05),且 siRNA2組的細(xì)胞侵襲能力明顯低于siRNA1組(P<0.05)。
　　結(jié)論:VEGF在腎細(xì)胞癌細(xì)胞中高表達(dá),且在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的增殖、凋亡、黏附、遷移和侵襲中發(fā)揮著重要作用;化學(xué)合成的VEGF-siRNA能特異性抑制腎細(xì)胞癌ACHN細(xì)胞株中VEGF的表達(dá),抑制細(xì)胞生長增殖