卵清蛋白及金黃色葡萄球菌超抗原經(jīng)皮膚致敏BALB-c鼠的實驗研究.pdf

1、目的：目前發(fā)現(xiàn)屏障功能減弱的皮膚上持續(xù)接觸各類蛋白質抗原引起炎癥性皮損，且伴隨總IgE及特異性IgE的升高，這種特殊的接觸性皮炎在特應性皮炎(atopicdermatitis，AD)患者中發(fā)生率較高。本實驗對BALB/c鼠腹部皮膚去除角質層，造成的屏障功能受損，用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)、金葡菌腸毒素A(StaphylococcalenterotoxinA，SEA)、金葡菌腸毒素B(Staphylococcalentero

2、toxinB，SEB)溶液的斑貼片經(jīng)皮膚致敏，研究致敏后可能引起的炎癥性皮損的組織學特點，同時檢測血清IgE水平、炎癥性皮損中代表性Th2/Th1細胞因子的mRNA的表達，研究其與AD的類似性。 方法：1實驗分組：32只BALB/c鼠隨機分為四組，分別用于制作OVA、SEA、SEB、生理鹽水(NS)經(jīng)皮膚致敏的動物模型及陰性對照組。 2致敏過程：OVA溶于雙蒸水，配成100mg/mL濃度；SEA、SEB配成100μg/m

3、L濃度。第1周，小鼠腹部除毛，透明寬膠帶在除毛部位黏貼8次去除角質層。20μLOVA/SEA/SEB溶液/生理鹽水滴加入斑試器內的濾紙片，用消毒繃帶將斑試器固定于腹部皮膚，確保與皮膚緊密相貼。第1周內每2～3天更換滴加新鮮溶液或生理鹽水的紙片，皮膚持續(xù)接觸溶液1周后取下斑試器。間隔2周，于第4周重復第1周給藥過程；再次間隔2周，于第7周再次重復第1周過程。 3標本的收集：小鼠在第7周末以10﹪烏拉坦腹腔注射麻醉，直視下心臟取血，

4、離心取血清。取下與斑試器接觸部位皮膚，一部分投于10﹪甲醛溶液中固定，石蠟包埋，制成7μm切片，HE染色；另一部分投入液氮保存，用于RT-PCR。 4組織學改變：光鏡下觀察皮損組織的病理變化，每只小鼠的切片隨機取5處測定表皮和真皮的厚度計算，各組均值，比較實驗組和對照組表真皮厚度。 5血清總IgE水平測定：采用酶聯(lián)免疫吸附法，操作按試劑盒說明書要求，顯色終止后立即在酶標儀上測定450nm吸光度值(A)，制作標準曲線，按曲

5、線換算各組樣本中血清IgE濃度，每個樣本設1個復孔。 6局部皮損組織中細胞因子IL-4、IL-5、IFN-γmRNA表達水平測定(RT-PCR法)：取斑貼片接觸部位同等重量皮膚勻漿，提取總RNA，用紫外分光光度計測定A260/A280比值確定無降解，反轉錄、擴增后電泳，求得與內參的吸光度比值，確定相對表達水平。 7統(tǒng)計學方法：應用SPSS11.0軟件分析，統(tǒng)計數(shù)據(jù)以(x)±s表示，實驗組分別與對照組配對t檢驗，P＜0.0

6、5時認為差異有統(tǒng)計學意義。 結果1癥狀學表現(xiàn)：各實驗組小鼠第2周均出現(xiàn)明顯的搔抓，接觸斑試器部位出現(xiàn)紅斑，皮損在整個致敏過程中持續(xù)存在。OVA組所有小鼠在紅斑基礎上出現(xiàn)水腫、丘疹，至第6周OVA組部分小鼠局部出脫屑、表皮剝脫。SEA組、SEB組僅見紅斑、脫屑。生理鹽水組小鼠皮膚肉眼所見無明顯改變。 2病理改變：鏡下所見與NS組相比較，OVA組皮損有明顯表皮顆粒層增生，棘層肥厚，真皮內血管擴張充血，并見較多淋巴細胞為主的單

7、一核細胞及中性粒細胞浸潤，部分炎癥細胞移入表皮層。真皮內可見嗜酸性粒細胞。SEA組、SEB組亦可見表皮層增生，真皮內少量淋巴-單一核細胞及中性粒細胞浸潤，未見嗜酸性粒細胞。OVA組表皮和真皮厚度明顯增加。3血清IgE水平的改變：OVA組小鼠血清總IgE顯著上升(4852.677±1052.778pg/mL)，約為NS組(1080.873±366.772pg/mL)的四倍。SEA、SEB組IgE水平與NS組相比無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)

8、。 4局部皮損組織中細胞因子IL-4、IL-5、IFN-γmRNA表達水平：IL-4、IL-5、IFN-γ的擴增片段分別與理論設計相符。與NS組相比，OVA組小鼠皮損中IL-4、IL-5的表達上調，差異顯著；SEA、SEB組小鼠皮損中3種細胞因子的表達水平，無統(tǒng)計學差異。 結論1用100mg/mL的OVA在去除角質層的BALB/c鼠經(jīng)皮致敏，能使之產生局部炎癥性皮損，伴隨血清總IgE水平升高，并且局部皮損中Th2型細胞因